Lnc-RT Heroᵀᴹ I (mit gDNase) (Super Premix für die Erststrang-cDNA-Synthese aus lncRNA)
Spezifikationen
25×20μl Rxns, 50×20μl Rxns
Lnc-RT HeroTM I (mit gDNase) ist ein Reverse-Transkriptionssystem, das speziell für lncRNA entwickelt wurde, um genomische DNA-Kontaminationen schnell zu entfernen.Mit der 5×gDNase-Mischung kann das verbleibende Genom in der RNA bei 42 °C für 2 Minuten schnell entfernt werden, wodurch eine Beeinflussung der qPCR-Ergebnisse durch das Genom effektiv vermieden wird.
5×L-RT HeroTM Mix enthält Foregene LncRNA Reverse Transkriptase, die speziell von Foregene entwickelt wurde, eine neue Art von Reverse Transkriptase speziell für lncRNA und andere lange RNA-Komplex-Templates mit stärkerer RNA-Affinität und höherer Umkehraufzeichnungseffizienz.Das optimierte System beschleunigt die Reverse-Transkriptionsrate und kann RNA-Vorlagen mit hohem GC-Gehalt und komplexer Sekundärstruktur problemlos transkribieren.Die Erststrang-cDNA-Synthese kann bei 42 °C in 15 Minuten abgeschlossen werden.
Kit-Komponenten
| 5× gDNase-Mix |
| 5× L-RT HeroTM Mix |
| RNase-freies ddH2O |
| Anweisungen |
Merkmale und Vorteile
■Effiziente Fähigkeit zur Entfernung von gDNA, wodurch gDNA in der Vorlage innerhalb von 2 Minuten entfernt werden kann.
■ Es kann die Transkription von lncRNA effizient umkehren.Wenn das Reverse-Transkriptionsprodukt einer qPCR unterzogen wird, ist der Ct-Wert niedriger als der eines herkömmlichen Reverse-Transkriptionssystems.
■ Effizientes Reverse-Transkriptionssystem, die Synthese des ersten cDNA-Strangs dauert nur 15 Minuten.
■ Komplexe Vorlagen: Vorlagen mit hohem GC-Gehalt und komplexer Sekundärstruktur können auch mit hoher Effizienz umgekehrt werden.
■ Hochempfindliches Reverse-Transkriptionssystem, Vorlagen auf pg-Ebene können auch qualitativ hochwertige cDNA erhalten.
■ Das Reverse-Transkriptionssystem weist eine hohe thermische Stabilität auf, die optimale Reaktionstemperatur liegt bei 42 °C℃, und es hat immer noch eine gute Reverse-Transkriptionsleistung bei 50℃.
Kit-Anwendung
Relative quantitative Analyse von lncRNA.
Absolute quantitative lncRNA-Analyse.
Es kann Spuren-RNA wie RNA-Viren schnell und genau analysieren.
Reverse Transkription von RNA-Templates mit hohem GC-Gehalt oder komplexer Sekundärstruktur.
Arbeitsablauf
Lagerung und Haltbarkeit
Das Kit sollte bei -20 °C gelagert werden°C. Lagern Sie das Produkt in einem Kühlschrank mit konstanter Temperatur bei -20 °C°C sofort nach Erhalt.Bei geeigneten Lagerbedingungen wird das Produkt während der einjährigen Gültigkeitsdauer keine Leistungseinbußen hinnehmen.
Leitfaden zur Problemanalyse
The following is an analysis of the problems that may be encountered in the use of Lnc-RT HeroTM I (With gDNase) series kits, hoping to be helpful to your experiments. In addition, we have dedicated technical support to help you with other experimental or technical problems beyond the operating instructions and questions. If you have any needs, please contact us: 028-83361257 or E-mail: Tech@foregene.com.
Non-spezifische Verstärkung
1. Unangemessenes Primer-Design
Empfehlung: Grundierungen entsprechend den Grundsätzen des Grundierungsdesigns entwerfen.
2. Genomreste.
Vorschlag: Stellen Sie sicher, dass die Reaktionstemperatur im ersten Schritt der gDNA-Entfernung 42 °C beträgt. Die Reaktionszeit kann auch auf 5 Minuten verlängert werden.
Kein Amplifikationssignal durch RT-qPCR
1. RNA wird abgebaut.
Empfehlung: Das Material für die RNA-Extraktion sollte möglichst frisch sein und es sollte hochwertige und hochreine RNA verwendet werden.
2. RNA enthält Inhibitoren.
Empfehlung: Reverse Transkriptionsinhibitoren umfassen im Allgemeinen SDS, Guanidinsalze, EDTA usw. Es wird empfohlen, das RNA-Präzipitat mit 70 % Ethanol zu waschen, um die Inhibitoren zu entfernen.
3. Probleme beim Primer-Design.
Empfehlung: Entwerfen Sie die Primer gemäß dem Primer-Designprinzip für die Inspektion neu.
Das Zielband erscheint in der leeren Kontrolle
1. Kontamination von Betriebswerkzeugen oder Reagenzien.
Empfehlung: Alle Reagenzien oder Geräte für das Experiment sollten autoklaviert werden.Gehen Sie bei der Handhabung vorsichtig und vorsichtig vor, um zu verhindern, dass DNA-Proben in die Pipette gesaugt werden oder aus dem Zentrifugenröhrchen verschüttet werden.
2. Bei der Vorbereitung des PCR-Reaktionssystems ist eine Kontamination aufgetreten.
Empfehlung: Treffen Sie bei der Handhabung die erforderlichen Vorsichtsmaßnahmen, wie z. B. das Tragen von Latexhandschuhen und die Verwendung von Filterspitzen.Verwenden Sie Real Time PCR Mix in einem kontaminationssicheren System.
3. Die Primer werden abgebaut.
Vorschlag: Verwenden Sie die SDS-PAGE-Elektrophorese, um festzustellen, ob die Primer abgebaut sind, und ersetzen Sie sie durch neue Primer für Fluoreszenzdetektionsexperimente.
Bedienungsanleitung:
