Die folgende Analyse möglicher Probleme inBukkalTupfer/Freihandelsabkommen card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Die Reinigungssäule ist verstopft

In diesem Kit wird bei der genomischen DNA-Extraktion die Reinigungssäule ohne Zentrifugationsschritt direkt an der enzymatischen Lysemischung der Probe adsorbiert, und die Reinigungssäule kann aufgrund unvollständiger Enzymisierung und hoher Viskosität der Probe blockiert sein.

Folgende mögliche Ursachen sind möglich:

1. Unvollständiger enzymatischer Aufschluss von Gewebeproben.

Empfehlung: Die Probenverarbeitungszeit von Foregene Protease kann entsprechend verlängert werden oder der Überstand kann nach Zentrifugation bei 12.000 U/min (~13.400 U/min) entnommen werden× g) für 5 Min.

2. Übermäßiger Einsatz von Gewebeproben oder großen Geweben.

Empfehlung: Am besten 1 nicht überschreitenBukkal Tupfer in die Probe;Wenn die Probe zu groß ist, erhöhen Sie die Dosierung von Puffer ST1, Foregene Protease und Puffer ST2 entsprechend.

3. Die Probenviskosität ist zu hoch.

Empfehlung: Proben können vor der genomischen DNA-Extraktion entsprechend mit 10 mM Tris-HCl verdünnt werden.

4. Fragmente der Blutkarte wurden ausgesaugt.

Empfehlung: Die vorübergehende Zentrifugationszeit von Schritt 6 der genomischen Extraktion von Blutflecken (FTA-Karte) kann entsprechend verlängert werden.

Geringe Ausbeute oder keine DNA

Es gibt oft eine Vielzahl von Faktoren, die die Ausbeute genomischer DNA beeinflussen, darunter Probenherkunft, Probenlagerungsbedingungen, Probenvorbereitung, Manipulation usw.

Bei der Extraktion kann keine genomische DNA gewonnen werden

Die möglichen Ursachen sind wie folgt:

1. Eine unsachgemäße Aufbewahrung von Proben oder eine zu lange Lagerung führt zum Abbau der genomischen DNA.

Empfehlung: Mundabstriche sollten vorzugsweise frisch entnommen werden, und es wird nicht empfohlen, konservierte Abstriche für genomische DNA-Extraktionsverfahren zu verwenden;Blutfleckenproben sollten eine qualifizierte Qualität gewährleisten und die Lagerzeit sollte nicht zu lang sein.

2. Eine zu geringe Gewebenutzung kann dazu führen, dass die entsprechende genomische DNA nicht extrahiert wird.

Empfehlung: Befolgen Sie diebuccal Tupfer-Probenahmeanweisungen in der Bedienungsanleitung und so oft wie möglich abwischen, damit genügend Zellen für die genomische DNA-Extraktion am Mundtupfer haften können;Für die Probenentnahme aus Blutflecken kann die Schnittfläche für Blutflecken entsprechend vergrößert werden.

3. Die Foregene-Protease wird nicht ordnungsgemäß konserviert, was zu einer Verringerung ihrer Aktivität oder Inaktivierung führt.

Empfehlung: Bestätigen Sie die Lagerbedingungen vonder FOregene-Protease oder ersetzen Sie sie durch eine neue Foregene-Protease für die enzymatische Reaktion.

4. Eine unsachgemäße Aufbewahrung des Kits oder eine zu lange Lagerzeit führt zum Ausfall einiger Komponenten im Kit.

Empfehlung: Neu kaufenBukkal Abstrich-DNAIsolation Kit für verwandte Verfahren.

5. Puffer WB fügt kein absolutes Ethanol hinzu.

Empfehlung: Stellen Sie sicher, dass Puffer WB das richtige Volumen an absolutem Ethanol hinzufügt.

6. Der Eluent wird nicht korrekt auf den Silikonfilm aufgetragen.

Empfehlung: 65 hinzufügen°CVorgewärmtes Elutionsmittel in die Mitte der Silikonmembran tropfen und 5 Minuten bei Raumtemperatur belassen, um die Elutionseffizienz zu erhöhen.

LGenomische DNA mit geringer Ausbeute isoliert

Folgende mögliche Ursachen sind möglich:

1. Eine unsachgemäße Aufbewahrung von Proben oder eine zu lange Lagerung führt zum Abbau der genomischen DNA.

Empfehlung: Orale Abstriche werden vorzugsweise frisch entnommen und konservierte Abstriche sollten nicht für die Extraktion genomischer DNA verwendet werden.

2. Wenn die Menge der Gewebeprobe zu gering ist, ist der Gehalt an extrahierter genomischer DNA geringer.

Empfehlung: Befolgen Sie die Anweisungen zur Entnahme von Mundabstrichen in der Bedienungsanleitung und wischen Sie so oft wie möglich ab, damit genügend Zellen für die Extraktion genomischer DNA am Mundabstrich anhaften können.

3. Die Foregene-Protease wird nicht ordnungsgemäß konserviert, was zu einer Verringerung ihrer Aktivität oder Inaktivierung führt.

Empfehlung: Bestätigen Sie die Lagerbedingungen vonthe Foregene Protease oder ersetzen Sie es durch ein neues Foregene-Protease für enzymatische Reaktionen.

4. Eluentenprobleme.

Empfehlung: Zur Elution Puffer EB verwenden;bei Verwendung von ddH₂O oder andere Eluenten bestätigen, dass der pH-Wert des Eluats zwischen 7,0 und 8,5 liegt.

5. Das Eluat wird nicht korrekt zugetropft.

Empfehlung: Geben Sie Eluententropfen in die Mitte der Silikonmembran und lassen Sie sie 5 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen, um die Elutionseffizienz zu erhöhen.

6. Die Elutionsflüssigkeit sammelt sich zu wenig an.

Empfehlung: Verwenden Sie für die genomische DNA-Elution mindestens den in der Anleitung geforderten Eluentennicht weniger als 15μl.

Low Reinheit of genomische DNAisoliert

Eine geringe Reinheit der genomischen DNA kann zum Scheitern oder zu unbefriedigenden Ergebnissen nachfolgender Experimente führen, z. B.: Enzyme können nicht aufgeschnitten werden, PCR kann das gewünschte Genfragment nicht erhalten usw.

Die möglichen Ursachen sind wie folgt:

1. Heteroproteinverschmutzung, RNA-Verschmutzung.

Analyse: Die Reinigungssäule wurde nicht mit Puffer PW gewaschen;Die Puffer-PW-Waschreinigungssäule wurde nicht mit der richtigen Zentrifugalgeschwindigkeit gewaschen.

Empfehlung: Stellen Sie sicher, dass sich im Überstand kein Niederschlag bildet, bevor Sie Ethanol hinzufügen.Stellen Sie sicher, dass Sie die Reinigungssäule gemäß den Anweisungen waschen. Dieser Schritt kann nicht ausgelassen werden.

2. Verunreinigung durch Ionen.

Analyse: Die Puffer-WB-Waschreinigungssäule wurde weggelassen oder nur einmal gewaschen, was zu einer verbleibenden ionischen Verunreinigung führte.

Empfehlung: Waschen Sie Buffer WB unbedingt zweimal wie angegeben, um Restionen so weit wie möglich zu entfernen.

3. RNA-Enzym-Kontamination.

Analyse: Dem Puffer wurden fremde RNasen zugesetzt;Der Puffer-PW-Waschvorgang war fehlerhaft, was zu RNase-Resten führte und sich auf nachgelagerte experimentelle RNA-Vorgänge wie die In-vitro-Transkription auswirkte.

Empfehlung: Nukleinsäure der Foregene-Serieisolationskits können RNA ohne zusätzliche Zugabe von RNase entfernen,daher DNA-Isolierungskit für Mundschleimhautabstrich/FTA-Kartebrauchen't RNase hinzufügen;Befolgen Sie unbedingt die Anweisungen für die Puffer-PW-Wasch- und Reinigungssäule. Dieser Schritt kann nicht ausgelassen werden.

4. Ethanolrückstände.

Analyse: Puffer WB führte nach dem Waschen der Reinigungssäule keine Zentrifugation im leeren Röhrchen durch.

Empfehlung: Führen Sie die korrekte Zentrifugation mit leeren Röhrchen gemäß den Anweisungen durch.

5. Sonstige Verschmutzung durch Verunreinigungen.

Analyse: Gespeicherte Proben oder Sonderproben werden nicht vorbehandelt.

Empfehlung: Probe gemäß Anleitung gründlich vorbehandeln.