1: Ersetzen Sie die Versuchsmaterialien rechtzeitig

Richten Sie eine (NTC-)Negativkontrolle ein und wiederholen Sie dies viele Male.Sobald festgestellt wird, dass im Labor eine PCR-Produktkontamination vorliegt, ersetzen Sie rechtzeitig alle Versuchsmaterialien.Zum Beispiel: Primer erneut verdünnen und vorbereiten, Pipettenspitze, EP-Röhrchen, ddH2O usw. erneut sterilisieren, durch eine neue Pipette ersetzen und vorübergehend andere Labore ausleihen, um PCR-Experimente durchzuführen.Das kontaminierte Labor muss belüftet und mit ultravioletten Strahlen bestrahlt werden, bis die PCR-Produktkontamination beseitigt ist, bevor mit dem Experiment fortgefahren wird.

2: UV-Belichtungszeit verlängern

Es ist zu beachten, dass zur Entfernung von DNA-Kontaminationen die regelmäßige UV-Bestrahlung um 2 Stunden als üblich verlängert werden sollte.Dennoch ist die Wirkung der UV-Bestrahlung bei der Entfernung kleiner Fragmente (unter 200 bp) der DNA-Kontamination immer noch nicht gut.

Die ultraviolette Wellenlänge (nm) beträgt im Allgemeinen 254/300 nm und reicht aus, um 30 Minuten lang zu bestrahlen.Es ist zu beachten, dass bei der Wahl von UV zur Eliminierung der Kontamination durch PCR-Restprodukte die Länge des PCR-Produkts und die Basenverteilung in der Produktsequenz berücksichtigt werden sollten.UV-Bestrahlung ist nur bei langen Fragmenten über 500 bp wirksam und hat bei kurzen Fragmenten nur geringe Auswirkungen.

Bei UV-Bestrahlung bilden die Pyrimidinbasen im PCR-Produkt Dimere.Diese Dimere können die Verlängerung beenden, aber nicht alle Pyrimidine in der DNA-Kette können Dimere bilden, und auch UV-Bestrahlung kann die Dimere aufbrechen..Der Grad der Dimerbildung hängt von der UV-Wellenlänge, der Art des Pyrimidin-Dimers und der Sequenz der an die Dimerstelle angrenzenden Nukleotide ab.Wenn die PCR-amplifizierten Fragmente klein sind, wird daher empfohlen, das Anti-PCR-Produktkontaminationssystem von UNG zu verwenden.

3: Häufig verwendete DNA-Verschmutzungsfänger

Beim Hinzufügen von Pipetten entstehen leicht Aerosole, die schwer zu vermeiden sind und sich schnell absetzen.Daher ist es zweifellos eine gute Wahl, häufig spezielle DNA-Verschmutzungsfänger zu verwenden, um die Ausbreitung der DNA-Verschmutzung zu verhindern.

4: Verwenden Sie das UNG-Antiverschmutzungssystem

Nachdem die PCR-Produktkontamination entfernt wurde, kann das Testlabor das Anti-PCR-Produktkontaminationssystem von UNG verwenden, um eine PCR-Produktkontamination zu verhindern.In allgemeinen Labors können Sie einfache experimentelle Partitionen durchführen, den PCR-Produktbereich strikt von anderen Bereichen trennen, bestimmte Laborregeln und -vorschriften festlegen und entsprechende Schulungen durchführen, um das Auftreten einer PCR-Produktkontamination zu verhindern.

Empfehlungen: Die Einrichtung eines angemessenen PCR-Labors, die Aufrechterhaltung einer guten PCR-Umgebung, die Formulierung von Standard-PCR-Betriebsverfahren und die Kultivierung eines strengen Betriebsbewusstseins der Experimentatoren sind der Schlüssel zur Vermeidung oder Reduzierung der Verschmutzung von PCR-Experimenten.