Aufbau eines SOP-Systems

Legen Sie eine PCR-Experiment-SOP fest, um das Verhalten des Experimentierpersonals zu standardisieren.

Die Experimentatoren halten sich strikt an die Betriebsabläufe und minimieren die PCR-Verschmutzung, die durch menschliche Faktoren verursacht werden kann, oder verhindern das Auftreten von Verschmutzungen im Betrieb.Darüber hinaus sollte der Experimentator über die entsprechenden Fachkenntnisse und Fähigkeiten verfügen, einschließlich der Beherrschung der zugehörigen Geräte, der Klärung des gesamten Arbeitsprozesses, der Beherrschung der Behandlungsmethoden von Kontaminationen und der Methoden der Laborqualitätskontrolle sowie der Fähigkeit, die Testergebnisse richtig zu interpretieren.

Gebäude eines Standard-PCR-Labors

Das PCR-Labor ist grundsätzlich in vier Bereiche unterteilt: Reagenzienvorbereitungsbereich, Probenverarbeitungsbereich, Amplifikationsbereich und Amplifikationsproduktanalysebereich.Die ersten beiden Bereiche sind Vorverstärkungsbereiche und die letzten beiden Bereiche sind Nachverstärkungsbereiche.Die Vorverstärkungszone und die Nachverstärkungszone sollten strikt getrennt sein.Experimentelle Materialien, Reagenzien, Aufzeichnungspapier, Stifte, Reinigungsmaterialien usw. können nur vom Voramplifikationsbereich zum Nachamplifikationsbereich, d. h. vom Reagenzienvorbereitungsbereich, Probenverarbeitungsbereich, Amplifikationsbereich und Amplifikationsproduktanalysebereich, fließen und dürfen nicht in umgekehrter Richtung fließen.Der Luftstrom im Labor sollte auch vom Vorverstärkungsbereich zum Nachverstärkungsbereich fließen, nicht in umgekehrter Richtung.

Reduzieren Sie experimentelle Schritte

Wenn das Labor nur PCR-Nachweis und -Identifizierung durchführt, wird empfohlen, anstelle der herkömmlichen PCR die quantitative Fluoreszenz-PCR zu verwenden.

Quantitative Fluoreszenz-PCR-Nachweisergebnisse können anhand von Fluoreszenzsignalen gesammelt und analysiert werden, so dass nach der Reaktion der Deckel für die Elektrophorese nicht geöffnet werden muss, wodurch eine Kontamination der PCR-Produkte durch das Austreten von Reaktionsprodukten und die Bildung von Aerosolen vermieden wird.Wenn Sie während des Ladeschritts der Gelelektrophorese die Anzahl der Kappenöffnungen erhöhen, ist eine Aerosolkontamination wahrscheinlich.Es wird empfohlen, die Anwendung der quantitativen PCR zu fördern und die qualitative PCR schrittweise zu ersetzen.

Einführung des UNG-Antiverschmutzungssystems

Für die PCR-Reaktion wird das UNG Anti-PCR-Produktkontaminationssystem verwendet.

Das System verwendet dUTP anstelle von dTTP.Nach der PCR-Reaktion werden alle PCR-Produkte (DNA-Fragmente) mit dUTP eingebaut;In der nächsten Runde der PCR-Reaktion wird das dem System hinzugefügte UNG-Enzym vor der PCR 5 Minuten lang bei 37 °C inkubiert, wodurch alle DNA-Fragmente, die dUTP enthalten, spezifisch abgebaut werden können, und dann wird eine PCR-Reaktion durchgeführt.Dadurch kann die durch PCR-Produkte verursachte Aerosolkontamination vollständig entfernt werden.Der Effekt ist in der folgenden Abbildung dargestellt:

Hinweis: Für die direkte PCR-Serie können Sie die Serienprodukte des Anti-PCR-Produktverschmutzungssystems von FJ Biotech wählen

Empfehlen

Für Labore, die groß angelegte Genotypisierungstests durchführen, wird dringend empfohlen, neben dem Bau angemessener Labore auch das UNG-Anti-PCR-Produktkontaminationssystem zum Testen von Reagenzien zu verwenden.

Zur Erinnerung: Der Einsatz dieses Systems kann die bereits entstandene PCR-Produktkontamination nicht beseitigen.Daher sollte das UNG-System zu Beginn des jeweiligen Tests verwendet werden und das UNG-System sollte immer für die PCR-Amplifikation verwendet werden, um eine Kontamination von PCR-Produkten zu verhindern.Falsch positiv.

Es wird empfohlen, das Direct PCR-UNG-System von Forge Biotech zu verwenden, wenn Sie groß angelegte Tests durchführen, wie zum Beispiel:Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Pflanzensamen-Direkt-PCR-Kit-UNG；

Tiergewebe-Direkt-PCR-Kit-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG;

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Diese Kit-Serie von Foregene kann nicht nur den PCR-Nachweis schnell und in großem Maßstab durchführen, sondern auch die Kontamination von PCR-Produkten wirksam verhindern und kontrollieren.