Führen

Lange nichtkodierende RNA, lncRNA, ist eine nichtkodierende RNA mit einer Länge von mehr als 200 Nukleotiden, im Allgemeinen zwischen 200 und 100.000 nt.lncRNA reguliert die Genexpression auf epigenetischer, Transkriptions- und posttranskriptioneller Ebene und ist an der Stummschaltung des X-Chromosoms, der Genomprägung und Chromatinmodifikation, der Transkriptionsaktivierung, der Transkriptionsinterferenz, dem Kerntransport, der Regulierung des Zellzyklus, der Regulierung der Zelldifferenzierung und Dosiskompensationseffekten (Dosierungskompensationseffekt) beteiligt.

01  Arten und Eigenschaften von LncRNA

lncRNA wird entsprechend den verschiedenen Quellen ihrer Entstehung in viele Typen unterteilt, wie in der Abbildung oben dargestellt.Hat die folgenden Eigenschaften:

1. lncRNAs sind normalerweise länger, mit dynamischer Expression und unterschiedlichen Spleißmethoden während der Differenzierung
2. Im Vergleich zu kodierenden Genen weist lncRNA normalerweise ein geringeres Expressionsniveau auf
3. Die meisten lncRNAs weisen eine offensichtliche zeitliche und räumliche Expressionsspezifität im Prozess der Gewebedifferenzierung und -entwicklung auf
4. Es gibt charakteristische Ausprägungen bei Tumoren und anderen Krankheiten
5. Die subzellulären Standorte von lncRNA sind vielfältig
6. Die Sequenz weist eine geringe Erhaltung auf, die Funktion weist jedoch einen gewissen Erhaltungsgrad usw. auf.

02 Häufig gestellte Fragen zur LncRNA Reverse Transkription

Aufgrund des geringen Gehalts an lncRNA in Zellen, der großen Länge und der Struktur auf hohem Niveau weist diese RNA oft komplexe Strukturen wie Stammschleifen oder Haarnadeln auf, und RT-qPCR ist anfällig für Probleme einer erfolglosen reversen Transkription oder einer geringen Effizienz.

03 LncRNA-Reverse-Transkriptionslösung

In der zentralen Regel wird der Prozess, bei dem RNA-Viren ihre eigene Reverse Transkriptase verwenden, um DNA unter Verwendung von RNA als Matrize zu synthetisieren, Reverse Transkription genannt.Der Prozess der Verwendung von RNA-Virus-Reverse-Transkriptase zur Synthese einer cDNA-Matrize in vitro wird als Reverse-Transkription bezeichnet.Die Hauptelemente des Reverse-Transkriptions-Systems: RNA-Matrize, Reverse Transkriptase, Primer und andere Komponenten.

1.RNA-Vorlage

Der Einfluss der RNA-Matrize auf die Reverse Transkription spiegelt sich in ihrer Struktur, Reinheit und Integrität wider.Je höher die Reinheit und Integrität der extrahierten RNA ist, desto höher ist die Effizienz der reversen Transkription und desto genauer sind die anschließenden quantitativen Ergebnisse.Die mit häufig verwendeten RNA-Extraktionsreagenzien gereinigte RNA enthält häufig Rückstände von Alkohol und Guanidinsalzen, die eine starke Hemmwirkung auf die meisten Reversen Transkriptasen haben.

2.Reverse Transkriptase

Die Reverse Transkriptase hat einen entscheidenden Einfluss auf das gesamte System der Reverse Transkription.Die in den meisten Labors verwendete geeignete Temperatur für die Reverse Transkriptase beträgt im Allgemeinen 42 °C.Tatsächlich erfordert die Öffnung der High-Level-RNA-Struktur eine höhere Temperatur und die Anforderungen an die Reverse Transkriptase sind höher.

3.Grundierung

Zu den Reverse-Transkriptions-Primern gehören genspezifische Primer, Zufallsprimer und Oligo-dT-Primer.Die meisten lncRNAs enthalten keine PolyA-Schwänze und es ist wichtig, die Zufallsprimer richtig mit Oligo dT abzugleichen.

4.Andere Komponenten

Da RNA besonders leicht abbaubar ist, kann die Einführung von Komponenten in das Reverse-Transkriptionssystem minimiert werden, was den Eintritt von RNase wirksam verhindern und den reibungslosen Ablauf der Reverse-Transkription gewährleisten kann.

Foregenewird aus einer RNA-Vorlage gewonnen, Reverse-Transkription zu qPCR

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Das Reverse-Transkriptionssystem weist eine hohe thermische Stabilität auf und weist auch bei 50 °C eine gute Reverse-Transkriptionsleistung auf.

Vorlagen mit hohem GC-Gehalt und komplexer Sekundärstruktur können mit hoher Effizienz umgekehrt werden.

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