Einführung:

RNA-Moleküle können umfassend mit anderen biologischen Molekülen wie Proteinen, DNA und RNA interagieren und liegen daher in Zellen und Organismen in Form makromolekularer Komplexe vor.Unter ihnen sind RNA-Protein-Komplexe die Existenz und Funktion von RNA. Eine der wichtigen Formen von.RNA-Pulldown ist eine klassische Methode zum Screening und Identifizieren von RNA-Molekülen, insbesondere der interagierenden Proteine ​​von lncRNA-Molekülen, und wird von der Mehrheit der Forscher und internationalen renommierten Fachzeitschriften anerkannt.Heute wird FORREGENE das experimentelle Prinzip und den technischen Prozess des RNA-Pulldowns mit Ihnen teilen, vielleicht können Sie es nutzen

1. Das experimentelle Prinzip der RNA-Pulldown-Technologie:

In-vitro-Transkription und Synthese von Biotin-markierter Ziel-lncRNA oder lncRNA-Fragmenten (einschließlich RNA-Fragmenten, die als Positiv- und Negativkontrollen verwendet werden) und Inkubation mit Zellextrakten;Verwenden Sie Avidin-verankerte Magnetkügelchen, um RNA-Protein- oder RNA-RNA-Komplexe zu sammeln. Nach gründlichem Waschen wird der Komplex eluiert.Wenn Sie das Protein-Zielmolekül erkennen, das mit lncRNA interagiert, führen Sie eine Proteinelektrophorese am RNA-Pull-Down-Produkt durch, erkennen Sie das Zielprotein durch Silberfärbung und schneiden Sie das Gel für die Massenspektrometrie auf;Führen Sie auch direkt eine Western-Blot-Verifizierung des Pull-Down-Produkts durch.falls nachgewiesen: Für RNA-Zielmoleküle, die mit lncRNA interagieren, werden RNA-Pulldown-Produkte einer RNA-Extraktion unterzogen und ein spezifischer qRT-PCR-Nachweis durchgeführt.

2. Prozess des Experimentierens mit der RNA-Pulldown-Technologie:

3. Technischer Service für den RNA-Pulldown von FOREGENE:

Zellkultur

Herstellung von Zell-Gesamt-/Kern-/Plasmaproteinextrakt

RNA-Pulldown-Experiment

SDS-PAGE-Elektrophorese, Silberfärbung

Massenspektrometrie und WB-Experimente

Experimenteller Bericht

4. Experimenteller Fall

Die folgende Abbildung zeigt die Ergebnisse des RNA-Pulldowns und der SDS-PAGE-Elektrophorese-Detektion von FJ Bio-Bio, wobei der rote Pfeil die Differenzbande markiert:

Die Forschungsgruppe von Professor Song Xu von der Sichuan-Universität verfügt über eine 15-jährige Erfahrung im Bereich der lncRNA-Forschung.Foregene Bio und die Forschungsgruppe von Professor Song Xu haben gemeinsam die RNA-Pulldown-Technologie von lncRNA auf den Markt gebracht, die Ihnen ein zufriedenstellendes Ergebnis für Ihr Experiment liefert.