Labortests beginnen mit der Probenentnahme, und die Probenentnahme ist am leichtesten zu übersehen.Das Wichtigste bei der Probenentnahme ist die Auswahl des richtigen Probentyps, die Verwendung geeigneter Probenahmewerkzeuge sowie die Durchführung eines angemessenen Transports und einer angemessenen Verarbeitung.

I. Probentyp

Gängige Probentypen sind wie folgt:

Die Probenahmemethode kann sich auf die technischen Spezifikationen für die Umweltüberwachung des neuen Coronavirus auf dem Agrarhandelsmarkt (Basar) beziehen:

1. Abstrichproben aus Rachenabstrichen, Händen, Kleidung und anderen Gegenständen von Ärzten: Es ist erforderlich, die Viruskonservierungslösung im Virusprobenröhrchen zu verwenden und die Wattestäbchen vollständig zu infiltrieren.Die Oberfläche des Bodens wird wiederholt aufgetragen und mehr als dreimal abgespült.Gleichzeitig ist es erforderlich, eine verteilte Mehrpunktprobenahme auf der Oberfläche des abgetasteten Objekts durchzuführen.

2. Abstrichproben von Lebensmitteloberflächen: Lebensmittelproben können nicht direkt entnommen werden.Die zu sammelnden Lebensmittel sollten vor der Entnahme von Abstrichproben sorgfältig getrennt und in einem sauberen Probenahmebeutel aufbewahrt werden.Es ist erforderlich, die Viruskonservierungslösung im Virusproberöhrchen zu verwenden, nachdem das Probenahme-Wattestäbchen vollständig eingeweicht wurde, um die Oberfläche der zu entnehmenden Lebensmittelprobe mehr als dreimal zu verschmieren und abzuspülen.Gleichzeitig ist es notwendig, eine verteilte Mehrpunktprobenahme auf der Probenoberfläche durchzuführen.

3. Abwasserproben: Wählen Sie entsprechend der Verteilung des Entwässerungssystems auf dem Markt 2-3 Standorte für die Abwasserprobenahme aus, wobei der Schwerpunkt auf der Sammlung des internen Rohrnetzes, der stromabwärts gelegenen Wasserfließrichtung oder der Verbindung mit dem kommunalen Rohrnetz liegt.Um eine Tupferprobe zu entnehmen, tauchen Sie diese mit einem Wattestäbchen in das Abwasser, damit es das Abwasser absorbiert, und spülen Sie es im Probenahmeröhrchen mehr als dreimal aus.Um Abwasserproben zu sammeln, verwenden Sie Polyethylen-Plastikflaschen, um 30–500 ml Abwasserproben zu sammeln;Für die Abwassersammlung mit einem Volumen von mehr als 500 ml können Polyethylen-Kunststoffeimer oder spezielle Anreicherungsgeräte für Wasserproben vor Ort verwendet werden.Gleichzeitig ist es notwendig, eine verteilte Mehrpunktprobenahme für den Abwasserprobenahmeort durchzuführen.

4. Tierproben: Bei lebenden Tieren können mit Probenahmetupfern Körperoberflächenabstriche, oropharyngeale Abstriche und Analabstriche entnommen werden, außerdem können Kot- oder Sekretproben entnommen und entsprechend im Protokollblatt vermerkt werden.Bei Tierproben, die einer Häutung usw. unterzogen wurden, verwenden Sie Wattestäbchen, um Abstrichproben von der Körperoberfläche und den Körperhöhlen zu entnehmen.Es ist erforderlich, die Viruskonservierungslösung im Virusprobenröhrchen zu verwenden, um das Probenahme-Wattestäbchen vollständig zu infiltrieren, und dann das Auftragen der Oberfläche der zu sammelnden Lebensmittelprobe zu wiederholen.Shabu mehr als dreimal.Gleichzeitig ist es notwendig, eine verteilte Mehrpunktprobenahme auf der Probenoberfläche durchzuführen.

5. Sonstige Geräte: Behälter für den Transport und die Aufzucht von Tieren wie Käfige oder Aquarien.Beobachten oder verstehen Sie zunächst die spezifischen Tierarten, die im Behälter gelagert und gezüchtet werden, und sammeln Sie Abstrichproben an der Innenwand des Behälters oder flüssige Proben des Inhalts.

6. Sammeln Sie Aerosolproben in Bereichen, in denen sich Menschen aufhalten, sowie in schlecht belüfteten örtlichen Handelsbereichen, Büros und Toiletten.

II.Probenahmewerkzeuge
1. Blutentnahmeröhrchen
Wenn Sie später Nukleinsäuretests und Antikoagulansproben durchführen müssen, wird empfohlen, zur Blutentnahme ein Vakuumblutgefäß mit dem Antikoagulans EDTA zu verwenden.Für Serumproben wird die Verwendung eines Vakuumblutgefäßes ohne Antikoagulans empfohlen.

2. Probenahmetupfer

Es wird empfohlen, Polypropylen-Tupfer anstelle von Calciumalginat-Tupfern oder Tupfern mit Holzstäben zu verwenden, da diese Substanzen enthalten können, die bestimmte Viren inaktivieren und PCR-Tests hemmen.Tupfer mit Watteköpfen können nicht verwendet werden, da Baumwollfasern eine starke Proteinadsorption aufweisen und nicht leicht in die anschließende Konservierungslösung eluiert werden.

In den „Technischen Spezifikationen für die 10-in-1-Mischsammlung und den Nachweis neuer Coronavirus-Nukleinsäuren“ ist klar festgelegt, dass „der Probenahmetupfer aus Polyester, Nylon und anderen Nicht-Baumwoll- und Nicht-Kalzium-Alginat-Materialien bestehen sollte und der Griff aus Nicht-Holz-Material bestehen sollte.“Die Bruchstelle liegt etwa 3 cm von der Oberseite des Tupferkopfes entfernt und kann leicht gebrochen werden.“

Das CDC in den Vereinigten Staaten erwähnte außerdem: „Verwenden Sie nur synthetische Fasertupfer mit Kunststoff- oder Drahtschäften.“Verwenden Sie keine Calciumalginat-Tupfer oder Tupfer mit Holzstiel,da sie Substanzen enthalten können, die einige Viren inaktivieren und PCR-Tests hemmen.

Derzeit weit verbreitet ist ein steriler Einweg-Nylon-Flocktupfer in Kombination mit einem Kunststoffstab.Der Beflockungstupfer hat eine bessere Wasseraufnahme- und -abgaberate.Je nach Probenahmestelle weist auch der Tupferkopf unterschiedliche Größen und Fasern auf.Die Dicke.”

3. Beispiel einer Transportkonservierungslösung

Konservierungslösung zur Virusinaktivierung: Eine angemessene Menge Guanidinsalzkonzentration und verschiedene Viruslysekomponenten können das Virus direkt lysieren, um Nukleinsäure freizusetzen, RNase und DNase zu inaktivieren und die Integrität der Nukleinsäure sicherzustellen, die für den anschließenden qPCR-Nachweis verwendet werden kann.Es kann nicht zur Viruskultivierung und -isolierung verwendet werden.

Virustransport- und Konservierungslösung: enthält Salze, Aminosäuren, Vitamine, Glukose und Proteine, die für das Überleben des Virus erforderlich sind und die Aktivität des Virus aufrechterhalten können.Es kann in Zukunft zur Nukleinsäureextraktion und zum Nachweis des Virus sowie zur Kultivierung und Abtrennung des Virus verwendet werden.

4. Probenkonservierungsröhrchen und Probenbeutel

Das Probenaufbewahrungsröhrchen sollte ein steriles Kunststoffröhrchen mit Schraubverschluss sein, das keine Nukleinsäure adsorbiert.Jedes Probenröhrchen sollte mit einem Probenbeutel abgedeckt werden, um ein Auslaufen und eine Kontamination der Probe zu verhindern.

III.Störende Substanzen in der Probe

Störende Substanzen in PCR-Experimenten

1. endogener Störer

In der Körperprobe vorhandene Stoffe können den Nachweis anderer Stoffe beeinträchtigen.

Blut:Häm (>1 mg/ml), Hämin (>0,1 ng/μl), Triglyceride, IgG usw.;

Urin:Harnstoff (20 mM);

Schemel:pflanzliche Polysaccharide, Cholat;

Gewebe:Protease, Kollagen;

Milch: Protease, Calciumion;

Drogen: Antibiotika, antivirale Medikamente, Hormone usw.

andere.

2. exogener Störer

Es handelt sich um Substanzen, die den Nachweis anderer Substanzen in vitro beeinträchtigen können.Probenzusätze und Substanzen, die bei der Probenentnahme und -verarbeitung kontaktiert werden können:

Testzubehör: Serumtrenngel, Probensammelbehälter und Gummistopfen, Katheter, Katheterspülflüssigkeit, Handschuhpuder usw.

Antikoagulanzien: Heparin (>0,1 U/ml), EDTA (>0,5 mM) usw.;

Organische Lösungsmittel: Isopropanol (>0,1 IU/ml), Betain, Dimethylsulfoxid, Formamid, Glycerin, PEG usw.;

Desinfektionsmittel: Alkohole (Ethanol > 1 %), Aldehyde, Phenole (Phenol > 0,2 %), Peroxide, starke Säuren (HCL), starke Laugen (NaOH) usw.;

Waschmittel:Sicherheitsdatenblatt (>0,005 %);

Boden: Humus

Farbstoff: Indigo

andere.

Unter tatsächlichen Probenahmebedingungen im Freien, wie z. B. beim Sammeln von Umweltproben, können die Proben eine Vielzahl störender Substanzen enthalten, und die Zusammensetzung der störenden Substanzen ist an jedem Ort unterschiedlich, was die Durchführung von PCR-Interferenzexperimenten entsprechend den örtlichen Bedingungen erfordert.

IV.Lager- und Transportbedingungen für Proben

Frisch entnommene klinische Proben sollten innerhalb von 2 bis 4 Stunden nach der Entnahme bei 2 °C bis 8 °C an das Labor geschickt werden.Innerhalb von 24 Stunden bei 4℃ lagern.Proben, die zur Virusisolierung und zum Nachweis von Nukleinsäuren verwendet werden, sollten so schnell wie möglich getestet werden.Proben, die innerhalb von 24 Stunden getestet werden können, können bei 4 °C gelagert werden;Proben, die nicht innerhalb von 24 Stunden nachgewiesen werden können, sollten bei -70 °C oder darunter gelagert werden (wenn nicht, bei 70 °C im Kühlschrank bei -20 °C lagern).

Zusammenfassung:Die standardisierte Sammlung, der Transport und die Lagerung der Proben sind für die anschließende Untersuchung unerlässlich.Die falsch negativen Ergebnisse vieler Labortests werden durch unsachgemäße Sammlung, Transport und Lagerung von Proben verursacht, die zum Abbau viraler Nukleinsäure führen.Viele Labore ignorieren jedoch immer noch die Bedeutung der Probenahme.Ich hoffe, dass dieser Artikel die Aufmerksamkeit aller auf die Probenahme wecken und eine wissenschaftlichere und vernünftigere Probenahme ermöglichen kann!

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