PCR-Methoden und Nukleinsäure-Aerosolkontamination in Nukleinsäure-Testlabors sind wie zwei Seiten einer Medaille.Wir können uns nur dafür entscheiden, es zu haben oder nicht, aber wir können nicht entscheiden, ob wir es wollen oder ausgeben.

1. Screening von DNA-Entfernern

Um eine räumliche Entfernung von Nukleinsäure-Aerosolkontaminationen zu erreichen, ist es zunächst notwendig, DNA-Entferner auszusortieren, die Nukleinsäuren in flüssigem Zustand entfernen können.Denn es gibt nicht viele DNA-Entferner, die wirklich funktionieren.Informationen zur experimentellen Methode finden Sie unter: DNA-Entferner dürfen keine „geheime Ecke“ des Labors sein!

In diesem Experiment wurden 100 Kopien/μL (CT etwa 31) des durch digitale PCR quantifizierten ASFV-Plasmids und DNA-Entferners in gleichen Volumina gemischt und dann 10 Minuten, 20 Minuten bzw. 30 Minuten bei Raumtemperatur umgesetzt.Nach der Nukleinsäureextraktion wurde eine qPCR-Amplifikation durchgeführt.Verglichen wurde eine mit Plasmid und Wasser gemischte Positivkontrolle.Da das Experiment nicht gleichzeitig abgeschlossen wurde, kann es zu einer gewissen Abweichung zwischen den Ergebnissen kommen, die jedoch keinen Einfluss auf den Abschluss des Experiments hat.Bisher habe ich 10 kommerzielle DNA-Entfernerprodukte bewertet.Nur die Produkte Nr. 1, Nr. 6 und Nr. 8 können Plasmid-DNA im flüssigen Zustand effektiv abbauen.Andere Produkte haben fast keine Wirkung.

Tabelle 1 Nukleinsäureentfernungseffekt eines im Handel erhältlichen DNA-Entferners

2. Das Experiment zur DNA-Entfernungswirkung häufig verwendeter Desinfektionsmittel

1. Screening häufig verwendeter Desinfektionsmittel

Es gibt viele Arten von Desinfektionsmitteln, die üblicherweise in Labors verwendet werden: Aldehyde, Phenole, Alkohole, quartäre Ammoniumsalze, Peroxide, Chlorpräparate sowie Säuren und Basen.Die desinfizierende Wirkung dieser Desinfektionsmittel auf Mikroorganismen wurde durch Experimente vollständig bestätigt, es liegen jedoch keine ausreichenden experimentellen Daten zur Abbauwirkung von Nukleinsäuren vor.Nukleinsäuretestlabore benötigen ein Desinfektionsmittel, das nicht nur eine gute Desinfektionswirkung auf Mikroorganismen hat, sondern auch DNA abbauen kann.Die Testergebnisse zeigen, dass nur zwei Chlorpräparate aus 84 Desinfektionsmittel und Trichlorisocyanursäure sowie 1 M Salzsäure die Anforderungen erfüllen.Da 1 M Salzsäure stark ätzend ist, wird empfohlen, Chlorpräparate als Abfallentsorgung in Laboratorien für Nukleinsäuretests zu verwenden.Allerdings wirken Chlorpräparate korrosiv gegenüber Metallen und können nicht zur Desinfektion von Instrumenten und Geräten verwendet werden.

Tabelle 2 DNA-Entfernungseffekte verschiedener Arten von Desinfektionsmitteln

2. Die minimal wirksame Konzentration von Chlorpräparaten

Desinfektionsmittel auf Chlorbasis haben einen starken DNA-Abbaueffekt, können aber aufgrund ihrer Metallkorrosivität und -reizung zum Reinigen des Bodens, nichtmetallischer Arbeitsplatten, Einweichspitzen, Zentrifugenröhrchen und anderer Testgegenstände verwendet werden.

Gemäß den „Neuen technischen Richtlinien zur Desinfektion von Koronarpneumonie-Epidemien“: Schadstoffe (Blut, Sekrete und Erbrochenes des Patienten) verfügbares Chlor 5 g/L-10 g/L chlorhaltiges Desinfektionsmittel;Böden, Wände und Objektoberflächen verwenden verfügbares Chlor 1 g/L Chlordesinfektionsmittel: Kleidung, Bettwäsche und andere Textilien werden zunächst 30 Minuten lang in Chlordesinfektionsmittel mit 0,5 g/L verfügbarem Chlor eingeweicht und dann wie gewohnt gereinigt.

Tabelle 3 DNA-Entfernungseffekt verschiedener Konzentrationen von Chlordesinfektionsmittel

Die Testergebnisse zeigen Folgendes: Wenn die effektive Chlorkonzentration größer oder gleich 1,2 g/L ist, kann das chlorhaltige Desinfektionsmittel bei 5-minütiger Anwendung 100 Kopien/μL Plasmid vollständig abbauen.Bei 10-minütiger Einwirkung können 84 Desinfektionsmittel mit einer wirksamen Chlorkonzentration von mindestens 0,6 g/L 100 Kopien/μL Plasmide vollständig abbauen.

3. Experiment zur Entfernung von Luftverschmutzung durch Nukleinsäureaerosol

Wie kann die durch Nukleinsäureaerosole verunreinigte Luft gereinigt werden?Die meisten Überlegungen bestehen darin, eine mit Aerosolen kontaminierte Umgebung zu schaffen und diese dann zu reinigen, oder Nukleinsäuren nach der Kontamination zu reinigen.Für mich ist ein Experiment, das nicht wiederholt werden kann und dessen Ergebnisse nicht quantitativ analysiert werden können, bedeutungslos, daher habe ich mir einige Methoden zur desinfizierenden Luftdesinfektion ausgeliehen.Siehe „GB27948-2020 Allgemeine Anforderungen für Luftdesinfektionsmittel“ und „Technische Spezifikationen für Desinfektion“.

1. Testmaterialien

1.1 DNA-Entferner: In diesem Experiment wurden zwei kommerziell erhältliche DNA-Entferner 6 und 8 in Tabelle 1 ausgewählt.

1.2 Testplasmid: Wenn man bedenkt, dass der CT-Wert der meisten Laborverschmutzungen höher als 30 sein wird, beträgt die Konzentration des verwendeten ASFV-Genplasmids dieses Mal etwa 100 Kopien/μL und die fluoreszierende quantitative PCR-CT beträgt etwa 31,07.Fügen Sie das Plasmid dem beflockten Wattestäbchen hinzu und trocknen Sie es an der Luft.

1.3 Testgerät: Das Bilingkehan KVBOX-Desinfektionsgerät, das freundlicherweise von Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd. unterstützt wird, verfügt über eine hervorragende Luftdesinfektionsleistung mit Wasserstoffperoxid-Desinfektionsmittel und kann Sporen und andere Mikroorganismen wirksam abtöten.

1.4 Testraum: ein geschlossenes Transferfenster von etwa 0,1 Kubikmetern.

2. Testmethode

Die am Desinfektionsgerät eingestellte Desinfektionsmittelmenge beträgt 10 ml und die Konzentration beträgt 100 ml/m3, was viel höher ist als „GB27948-2020 Allgemeine Anforderungen für Luftdesinfektionsmittel“: Bei Verwendung der Aerosol-Sprühdesinfektion sollte die Desinfektionsmittelmenge ≤10 ml/m3 betragen