FAQ's fürTier-Gesamt-RNA-Isolierungskit

Die folgende Analyse der Probleme, auf die Sie stoßen könnenExtraktion von RNA aus tierischem Gewebe/Zellen will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA wird nicht extrahiert oder die RNA-Ausbeute ist gering

Es gibt oft eine Vielzahl von Faktoren, die die Rückgewinnungseffizienz beeinflussen, wie zum Beispiel: RNA-Gehalt der Gewebeprobe, Betriebsmethode, Elutionsvolumen usw.

1. Während des Betriebs wurde eine Eisbad- oder kryogene (4 °C) Zentrifugation durchgeführt.

Empfehlung: Während des gesamten Prozesses bei Raumtemperatur (15–25 °C) arbeiten, kein Eisbad durchführen und bei niedrigen Temperaturen zentrifugieren.

2. Unsachgemäße Probenkonservierung oder übermäßig lange Probenlagerung.

Empfehlung: Proben bei -80 °C lagern oder in flüssigem Stickstoff einfrieren und wiederholtes Einfrieren und Auftauen vermeiden;Versuchen Sie, frisches Gewebe oder kultivierte Zellen für die RNA-Extraktion zu verwenden.

3. Unzureichende Probenlyse.

Empfehlung: Achten Sie bei der Homogenisierung von Gewebe darauf, dass das Gewebe ausreichend homogenisiert ist und die Gewebezellen ausreichend gespalten sind, um die RNA-Freisetzung zu erklären.

4. Der Eluent wurde nicht korrekt hinzugefügt.

Empfehlung: Bestätigen Sie, dass RNase-Free ddH₂O wird tropfenweise in die Mitte der Membran der Reinigungssäule gegeben.

5. Es wurde nicht das richtige Volumen an absolutem Ethanol zu Puffer RL2 oder Puffer RW2 hinzugefügt.

Empfehlung: Befolgen Sie die Anweisungen, geben Sie die richtige Menge absolutes Ethanol zu Puffer RL2 und Puffer RW2 hinzu und mischen Sie gut, bevor Sie das Kit verwenden.

6. Die Dosierung der Gewebeprobe ist nicht angemessen.

Empfehlung: Verwenden Sie 10–20 mg Gewebe oder (1–5) × 10⁶Zellen pro 500 μl Puffer RL1, da eine übermäßige Gewebenutzung zu einer verringerten RNA-Extraktion führen kann.

7. Falsches Elutionsvolumen oder unvollständige Elution.

Empfehlung: Das Elutionsvolumen der Reinigungssäule beträgt 50-200 μl;Wenn der Elutionseffekt nicht zufriedenstellend ist, wird empfohlen, die Platzierungszeit bei Raumtemperatur nach Zugabe von vorgewärmtem RNase-Free ddH zu verlängern₂O, zB für 5-10 Min.

8. Die Reinigungssäule weist nach dem Waschen mit Puffer RW2 Ethanolrückstände auf.

Empfehlung: Wenn nach dem Waschen des Puffers RW2 und der Zentrifugation des leeren Röhrchens für 1 Minute Ethanolrückstände vorhanden sind, kann die Zeit für die Zentrifugation des leeren Röhrchens auf 2 Minuten erhöht werden, oder die Reinigungssäule kann 5 Minuten lang auf Raumtemperatur gestellt werden, um das restliche Ethanol ausreichend zu entfernen.

Gereinigte RNA wird abgebaut

Die Qualität der gereinigten RNA hängt von Faktoren wie der Konservierung der Probe, RNase-Kontamination und Manipulation usw. ab.

1. Gewebeproben werden nicht rechtzeitig aufbewahrt.

Empfehlung: Wenn Gewebeproben oder Zellen nicht rechtzeitig nach der Entnahme verwendet werden, kryokonservieren Sie sie sofort bei -80 °C oder flüssigem Stickstoff.Verwenden Sie zur Extraktion von RNA nach Möglichkeit eine frisch entnommene Gewebe- oder Zellprobe.

2. Wiederholtes Einfrieren und Auftauen von Gewebeproben.

Empfehlung: Bei der Lagerung von Gewebeproben ist es am besten, diese zur Konservierung in kleine Stücke zu schneiden und bei der Verwendung eines der Stücke zu entfernen, um ein wiederholtes Einfrieren und Auftauen der Probe und den Abbau der RNA zu vermeiden.

3. RNase wird eingeführt oder es werden während der Operation keine Einweghandschuhe, Masken usw. getragen.

Empfehlung: RNA-Extraktionsexperimente werden am besten in separaten RNA-Manipulationsräumen durchgeführt und der Tisch wird vor dem Experiment abgeräumt.

Tragen Sie während des Experiments Einweghandschuhe und -masken, um den durch die Einführung von RNase verursachten RNA-Abbau zu minimieren.

4. Reagenzien werden während des Gebrauchs mit RNase kontaminiert.

Empfehlung: Für entsprechende Experimente durch ein neues Animal Total RNA Isolation Kit ersetzen.

5. Die bei der RNA-Manipulation verwendeten Zentrifugenröhrchen, Spitzen usw. sind mit RNase kontaminiert.

Empfehlung: Stellen Sie sicher, dass die bei der RNA-Extraktion verwendeten Zentrifugenröhrchen, Spitzen, Pipetten usw. alle RNase-frei sind.

Die gereinigte gewonnene RNA wirkt sich auf nachgelagerte Experimente aus

Durch die Reinigungssäule gereinigte RNA. Wenn die Salzionen und der Proteingehalt zu groß sind, wirkt sich dies auf nachgelagerte Experimente aus, wie zum Beispiel: Reverse Transkription,Northern Blot et al.

1. Die eluierte RNA weist Salzionenreste auf.

Empfehlung: Bestätigen Sie, dass dem Puffer RW2 das richtige Volumen Ethanol zugesetzt wurde, und führen Sie zwei Reinigungssäulenwaschvorgänge mit der für den Betrieb angegebenen Zentrifugalgeschwindigkeit durch.Wenn Salzionenrückstände vorhanden sind, lassen Sie die Reinigungssäule 5 Minuten lang bei Raumtemperatur auf Puffer RW2 stehen und führen Sie eine Zentrifugation durch, um die Entfernung von Salzverunreinigungen zu maximieren.

2. Ethanolrückstände in eluierter RNA.

Empfehlung: Bestätigen Sie, dass Sie nach dem Waschen mit Puffer RW2 den Zentrifugationsvorgang des leeren Röhrchens mit der für den Betrieb angegebenen Zentrifugationsgeschwindigkeit durchführen, die Zeit des Zentrifugationsvorgangs des leeren Röhrchens auf 2 Minuten erhöhen, wenn noch Ethanolrückstände vorhanden sind, oder das Gerät nach der Zentrifugation des leeren Röhrchens 5 Minuten lang bei Raumtemperatur belassen, um die Entfernung von Ethanolrückständen zu maximieren.

Isolierung von Nucleinsäure-Probentypen

Mit den RNA-Isolierungskits von Foregene kann eine vollständige RNA-Isolierung/-Extraktion aus den folgenden Probenquellen durchgeführt werden: Tierisches Gewebe, Pflanzen, Zellen, Viren, Blut usw.

Wie lagere ich das Kit?

Lagerung bei Raumtemperatur für 24 Monate.