Wangenabstrich/FTA-Karte DNA-Isolierungskit Kit zur Extraktion oder Reinigung genomischer DNA aus Wangenabstrichen
Kit-Beschreibung:
Reinigen Sie schnell hochwertige genomische DNA aus Mundschleimhautabstrich-/FTA-Kartenproben.
◮Keine RNase-Kontamination:Die im Kit enthaltene Nur-DNA-Säule ermöglicht die Entfernung der RNA aus der genomischen DNA ohne Zugabe von RNase während des Experiments und verhindert so eine Kontamination des Labors durch exogene RNase.
◮Schnelle Geschwindigkeit:Foregene Protease hat eine höhere Aktivität als ähnliche Proteasen und verdaut Gewebeproben schnell;Der Vorgang ist einfach und die genomische DNA-Extraktion kann innerhalb von 20 bis 80 Minuten abgeschlossen werden.
◮Komfortabel:Die Zentrifugation wird bei Raumtemperatur durchgeführt und es ist keine Zentrifugation bei 4 °C bei niedriger Temperatur oder eine Ethanolfällung der DNA erforderlich.
◮Sicherheit:Es ist keine Extraktion organischer Reagenzien erforderlich.
◮Gute Qualität:Die extrahierte genomische DNA weist große Fragmente, keine RNA, keine RNase und einen extrem niedrigen Ionengehalt auf, was den Anforderungen verschiedener Experimente gerecht werden kann.
◮Mikroelutionssystem:Es kann die Konzentration genomischer DNA erhöhen, was für nachgelagerte Nachweise oder Experimente praktisch ist.
Beschreibung
Dieses Kit bietet eine effiziente und schnelle Methode zur Gewinnung hochkonzentrierter genomischer DNA aus Mundschleimhautabstrichen und FTA-Karten (Blutflecken).Nutzung unseres Unternehmens'Dank der einzigartigen Spinsäule und Formel mit Nur-DNA-Silicamembran und der Foregene-Protease kann hochkonzentrierte, hochwertige genomische DNA in 80 Minuten extrahiert werden.Die speziell entwickelte kleine Reinigungssäule bindet genomische DNA und die DNA kann mit einer kleinen Menge (15 μl) Elutionssystem zur Erhöhung der Konzentration der erhaltenen genomischen DNA, was für nachgeschaltete Nachweise oder Experimente praktisch ist.Das Kit kann eine oder mehrere Proben gleichzeitig verarbeiten, und der Reinigungsprozess erfordert keine Extraktion organischer Substanzen wie Phenol, Chloroform und keine zeitaufwändige Isopropanol- oder Ethanolfällung, und der Vorgang ist einfach und zeitsparend.
Spezifikationen
50 Vorbereitungen
Kit-Komponenten
| Puffer ST1 |
| Puffer ST2 |
| Lineares Acrylamid |
| Puffer-PW |
| Puffer WB |
| Puffer EB |
| Foregene-Protease |
| Nur-DNA-Säule |
| Anweisungen |
Merkmale und Vorteile
-Keine RNase-Kontamination: Die im Kit enthaltene Nur-DNA-Säule ermöglicht die Entfernung von RNA aus genomischer DNA, ohne dass während des Experiments RNase hinzugefügt werden muss, wodurch eine Kontamination des Labors durch exogene RNase vermieden wird.
-Schnelle Geschwindigkeit: Foregene-Protease hat eine höhere Aktivität als ähnliche Proteasen und verdaut Proben schnell;einfache Bedienung.
-Praktisch: Die Zentrifugation wird bei Raumtemperatur durchgeführt und es ist keine Zentrifugation bei 4 °C bei niedriger Temperatur oder eine Ethanolfällung der DNA erforderlich.
-Sicherheit: Es ist keine Extraktion organischer Reagenzien erforderlich.
-Hohe Qualität: Die extrahierte genomische DNA weist große Fragmente, keine RNA, keine RNase und einen extrem niedrigen Ionengehalt auf, was den Anforderungen verschiedener Experimente gerecht werden kann.
-Mikroelutionssystem: Es kann die Konzentration genomischer DNA erhöhen, was für nachgelagerte Nachweise oder Experimente praktisch ist.
Kit-Anwendung
Es eignet sich zur Reinigung genomischer DNA aus folgenden Proben: Mundschleimhautabstriche, FTA-Karte (Blutflecken).
Lagerung und Haltbarkeit
-Dieses Kit kann 12 Monate lang unter trockenen Bedingungen bei Raumtemperatur (15–25 °C) gelagert werden;Wenn es über einen längeren Zeitraum gelagert werden muss, kann es bei 2–8 °C gelagert werden.
Hinweis: Bei Lagerung bei niedriger Temperatur neigt die Lösung zur Ausfällung.Stellen Sie vor der Verwendung sicher, dass die Lösung im Kit eine Zeit lang bei Raumtemperatur aufbewahrt wird.Bei Bedarf 10 Minuten lang in einem 37 °C warmen Wasserbad vorwärmen, um den Niederschlag aufzulösen, und vor der Verwendung mischen.
-Foregene Protease-Lösung hat eine einzigartige Formel, die aktiv ist, wenn sie über einen längeren Zeitraum (3 Monate) bei Raumtemperatur gelagert wird;Seine Aktivität und Stabilität sind besser, wenn es bei 4 °C gelagert wird. Es wird daher empfohlen, es bei 4 °C zu lagern. Denken Sie daran, es nicht bei -20 °C aufzubewahren.
Die Reinigungssäule ist verstopft
In diesem Kit wird bei der genomischen DNA-Extraktion die Reinigungssäule ohne Zentrifugationsschritt direkt an der enzymatischen Lysemischung der Probe adsorbiert, und die Reinigungssäule kann aufgrund unvollständiger Enzymisierung und hoher Viskosität der Probe blockiert sein.
Folgende mögliche Ursachen sind möglich:
1. Unvollständiger enzymatischer Aufschluss von Gewebeproben.
Empfehlung: Die Probenverarbeitungszeit von Foregene Protease kann entsprechend verlängert werden oder der Überstand kann nach 5-minütiger Zentrifugation bei 12.000 U/min (~13.400 × g) entnommen werden.
2. Übermäßiger Einsatz von Gewebeproben oder großen Geweben.
Empfehlung: Es ist am besten, nicht mehr als 1 Mundschleimhautabstrich in der Probe zu verwenden;Wenn die Probe zu groß ist, erhöhen Sie die Dosierung von Puffer ST1, Foregene Protease und Puffer ST2 entsprechend.
3. Die Probenviskosität ist zu hoch.
Empfehlung: Proben können vor der genomischen DNA-Extraktion entsprechend mit 10 mM Tris-HCl verdünnt werden.
4. Fragmente der Blutkarte wurden ausgesaugt.
Empfehlung: Die vorübergehende Zentrifugationszeit von Schritt 6 der genomischen Extraktion von Blutflecken (FTA-Karte) kann entsprechend verlängert werden.
Geringe Ausbeute oder keine DNA
Es gibt oft eine Vielzahl von Faktoren, die die Ausbeute genomischer DNA beeinflussen, darunter Probenherkunft, Probenlagerungsbedingungen, Probenvorbereitung, Manipulation usw.
Bei der Extraktion kann keine genomische DNA gewonnen werden
Die möglichen Ursachen sind wie folgt:
1. Eine unsachgemäße Aufbewahrung von Proben oder eine zu lange Lagerung führt zum Abbau der genomischen DNA.
Empfehlung: Mundabstriche sollten vorzugsweise frisch entnommen werden, und es wird nicht empfohlen, konservierte Abstriche für genomische DNA-Extraktionsverfahren zu verwenden;Blutfleckenproben sollten eine qualifizierte Qualität gewährleisten und die Lagerzeit sollte nicht zu lang sein.
2. Eine zu geringe Gewebenutzung kann dazu führen, dass die entsprechende genomische DNA nicht extrahiert wird.
Empfehlung: Befolgen Sie die Anweisungen zur Entnahme von Mundschleimhautabstrichen in der Bedienungsanleitung und wischen Sie so oft wie möglich ab, damit genügend Zellen für die Extraktion genomischer DNA am Mundabstrich anhaften können.Für die Probenentnahme aus Blutflecken kann die Schnittfläche für Blutflecken entsprechend vergrößert werden.
3. Die Foregene-Protease wird nicht ordnungsgemäß konserviert, was zu einer Verringerung ihrer Aktivität oder Inaktivierung führt.
Empfehlung: Bestätigen Sie die Lagerbedingungen der Foregene-Protease oder ersetzen Sie sie durch eine neue Foregene-Protease für die enzymatische Reaktion.
4. Eine unsachgemäße Aufbewahrung des Kits oder eine zu lange Lagerzeit führt zum Ausfall einiger Komponenten im Kit.
Empfehlung: Erwerben Sie für entsprechende Verfahren ein neues DNA-Isolierungskit für Wangenabstriche.
5. Puffer WB fügt kein absolutes Ethanol hinzu.
Empfehlung: Stellen Sie sicher, dass Puffer WB das richtige Volumen an absolutem Ethanol hinzufügt.
6. Der Eluent wird nicht korrekt auf den Silikonfilm aufgetragen.
Empfehlung: Auf 65 °C vorgewärmte Eluententropfen in die Mitte der Silikonmembran geben und 5 Minuten bei Raumtemperatur stehen lassen, um die Elutionseffizienz zu erhöhen.
Isolierte genomische DNA mit geringer Ausbeute
Folgende mögliche Ursachen sind möglich:
1. Eine unsachgemäße Aufbewahrung von Proben oder eine zu lange Lagerung führt zum Abbau der genomischen DNA.
Empfehlung: Orale Abstriche werden vorzugsweise frisch entnommen und konservierte Abstriche sollten nicht für die Extraktion genomischer DNA verwendet werden.
2. Wenn die Menge der Gewebeprobe zu gering ist, ist der Gehalt an extrahierter genomischer DNA geringer.
Empfehlung: Befolgen Sie die Anweisungen zur Entnahme von Mundabstrichen in der Bedienungsanleitung und wischen Sie so oft wie möglich ab, damit genügend Zellen für die Extraktion genomischer DNA am Mundabstrich anhaften können.
3. Die Foregene-Protease wird nicht ordnungsgemäß konserviert, was zu einer Verringerung ihrer Aktivität oder Inaktivierung führt.
Empfehlung: Bestätigen Sie die Lagerbedingungen der Foregene-Protease oder ersetzen Sie sie durch eine neue Foregene-Protease für die enzymatische Reaktion.
4. Eluentenprobleme.
Empfehlung: Zur Elution Puffer EB verwenden;bei Verwendung von ddH2O oder andere Eluenten bestätigen, dass der pH-Wert des Eluats zwischen 7,0 und 8,5 liegt.
5. Das Eluat wird nicht korrekt zugetropft.
Empfehlung: Geben Sie Eluententropfen in die Mitte der Silikonmembran und lassen Sie sie 5 Minuten lang bei Raumtemperatur stehen, um die Elutionseffizienz zu erhöhen.
6. Die Elutionsflüssigkeit sammelt sich zu wenig an.
Empfehlung: Verwenden Sie für die Elution genomischer DNA Eluenten gemäß den Anweisungen, mindestens jedoch nicht weniger als 15 μl.
Geringe Reinheit der isolierten genomischen DNA
Eine geringe Reinheit der genomischen DNA kann zum Scheitern oder zu unbefriedigenden Ergebnissen nachfolgender Experimente führen, z. B.: Enzyme können nicht aufgeschnitten werden, PCR kann das gewünschte Genfragment nicht erhalten usw.
Die möglichen Ursachen sind wie folgt:
1. Heteroproteinverschmutzung, RNA-Verschmutzung.
Analyse: Die Reinigungssäule wurde nicht mit Puffer PW gewaschen;Die Puffer-PW-Waschreinigungssäule wurde nicht mit der richtigen Zentrifugalgeschwindigkeit gewaschen.
Empfehlung: Stellen Sie sicher, dass sich im Überstand kein Niederschlag bildet, bevor Sie Ethanol hinzufügen.Stellen Sie sicher, dass Sie die Reinigungssäule gemäß den Anweisungen waschen. Dieser Schritt kann nicht ausgelassen werden.
2. Verunreinigung durch Ionen.
Analyse: Die Puffer-WB-Waschreinigungssäule wurde weggelassen oder nur einmal gewaschen, was zu einer verbleibenden ionischen Verunreinigung führte.
Empfehlung: Waschen Sie Buffer WB unbedingt zweimal wie angegeben, um Restionen so weit wie möglich zu entfernen.
3. RNA-Enzym-Kontamination.
Analyse: Dem Puffer wurden fremde RNasen zugesetzt;Der Puffer-PW-Waschvorgang war fehlerhaft, was zu RNase-Resten führte und sich auf nachgelagerte experimentelle RNA-Vorgänge wie die In-vitro-Transkription auswirkte.
Empfehlung: Nukleinsäure-Isolierungskits der Foregene-Serie können RNA ohne zusätzliche Zugabe von RNase entfernen, daher muss dem Wangenabstrich-/FTA-Karten-DNA-Isolierungskit keine RNase hinzugefügt werden;Befolgen Sie unbedingt die Anweisungen für die Puffer-PW-Wasch- und Reinigungssäule. Dieser Schritt kann nicht ausgelassen werden.
4. Ethanolrückstände.
Analyse: Puffer WB führte nach dem Waschen der Reinigungssäule keine Zentrifugation im leeren Röhrchen durch.
Empfehlung: Führen Sie die korrekte Zentrifugation mit leeren Röhrchen gemäß den Anweisungen durch.
5. Sonstige Verschmutzung durch Verunreinigungen.
Analyse: Gespeicherte Proben oder Sonderproben werden nicht vorbehandelt.
Empfehlung: Probe gemäß Anleitung gründlich vorbehandeln.
