Cell Direct RT qPCR-Kit – SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready One-Step qRT-PCR-Kits
Beschreibungen
Dieses Kit verwendet ein einzigartiges Lysepuffersystem, das RNA aus kultivierten Zellproben für RT-qPCR-Reaktionen schnell freisetzen kann, wodurch der zeitaufwändige und mühsame RNA-Reinigungsprozess entfällt.Die RNA-Vorlage kann in nur 7 Minuten erhalten werden.Die 5×Direkter RT-Mix und 2×Mit den im Kit enthaltenen direkten qPCR Mix-SYBR-Reagenzien können Sie schnell und effektiv quantitative PCR-Ergebnisse in Echtzeit erhalten.
5×Direkter RT-Mix und 2×Direct qPCR Mix-SYBR weist eine starke Inhibitortoleranz auf und das Lysat der Proben kann direkt als Vorlage für RT-qPCR verwendet werden.Dieses Kit enthält die einzigartige hochaffine RNA-Foregene-Reverse-Transkriptase und Hot D-Taq DNA-Polymerase, dNTPs und MgCl2, Reaktionspuffer, PCR-Optimierer und Stabilisator.
Spezifikationen
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit-Komponenten
| Teil I | Puffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Puffer ST | |
| Teil II | DNA-Radierer |
| 5× Direkter RT-Mix | |
| 2× Direkter qPCR-Mix-SYBR | |
| 50× ROX-Referenzfarbstoff | |
| RNase-freies ddH2O | |
| Anweisungen | |
Merkmale und Vorteile
■Einfach und effektiv: Mit der Cell Direct RT-Technologie können RNA-Proben in nur 7 Minuten gewonnen werden.
■ Der Probenbedarf ist gering, es können nur 10 Zellen getestet werden.
■ Hoher Durchsatz: Es kann RNA in Zellen, die in 384-, 96-, 24-, 12- und 6-Well-Platten kultiviert wurden, schnell nachweisen.
■ DNA Eraser kann freigesetzte Genome schnell entfernen und die Auswirkungen auf nachfolgende experimentelle Ergebnisse erheblich reduzieren.
■ Das optimierte RT- und qPCR-System macht die zweistufige RT-PCR-Reverse-Transkription effizienter, die PCR spezifischer und resistenter gegen RT-qPCR-Reaktionsinhibitoren.
Kit-Anwendung
Anwendungsbereich: kultivierte Zellen.
- Durch Probenlyse freigesetzte RNA: Gilt nur für die RT-qPCR-Vorlage dieses Kits.
- Das Kit kann für folgende Zwecke verwendet werden: Genexpressionsanalyse, Überprüfung des siRNA-vermittelten Gen-Silencing-Effekts, Arzneimittelscreening usw.
Diagramm
Lagerung und Haltbarkeit
Teil I dieses Kits sollte bei 4℃ gelagert werden;Teil II sollte bei -20℃ gelagert werden.
Foregene Protease Plus II sollte bei 4 °C gelagert werden℃, nicht bei -20℃ einfrieren.
Reagenz 2×Direct qPCR Mix-SYBR sollte bei -20 °C gelagert werden℃im Dunkeln;Bei häufigem Gebrauch kann es auch bei 4 gelagert werden℃ für kurzfristige Lagerung (innerhalb von 10 Tagen aufbrauchen).
Prinzipien des Real-Time-PCR-Primer-Designs
Vorwärts-Primer und Rückwärts-Primer
Für die Echtzeit-PCR ist das Primerdesign sehr wichtig.Primer hängen mit der Spezifität und Effizienz der PCR-Amplifikation zusammen und können unter Bezugnahme auf die folgenden Prinzipien entworfen werden:
Primerlänge: 18–30 bp.
GC-Gehalt: 40-60 %.
Tm-Wert: Primer-Design-Software wie Primer 5 kann den Tm-Wert des Primers angeben.Die Tm-Werte der Upstream- und Downstream-Primer sollten möglichst nahe beieinander liegen.Es kann auch die Tm-Berechnungsformel verwendet werden: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Bei der Durchführung einer PCR wird im Allgemeinen eine Temperatur unterhalb des Primer-Tm-Werts von 5 °C als Annealing-Temperatur gewählt (die entsprechende Erhöhung der Annealing-Temperatur kann die Spezifität der PCR-Reaktion erhöhen).
Primer und PCR-Produkte:
Die Länge des Design-Primer-PCR-Amplifikationsprodukts beträgt vorzugsweise 100–150 bp.
Designprimer im sekundären Strukturbereich der Vorlage sollten möglichst vermieden werden.
Vermeiden Sie die Bildung von zwei oder mehr komplementären Basen zwischen den 3′-Enden der Upstream- und Downstream-Primer.
Die terminale Basis des Primers 3‘ kann nicht mit 3 weiteren aufeinanderfolgenden G oder C vorhanden sein.
Die Primer selbst dürfen keine komplementären Strukturen aufweisen, da sonst eine Haarnadelstruktur entsteht, die die PCR-Amplifikation beeinträchtigt.
ATCG sollte möglichst gleichmäßig in der Primersequenz verteilt sein und die 3′-terminale Base sollte als T vermieden werden.
Anhang 1: Ergänzungspaket mit Komponenten des Cell Direct RT-qPCR-Kits
1.Zelllyselösung
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| Kit-Komponenten (24-Well-Lysesystem / Well) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| TeilICH | Puffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Puffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| TeilII | DNA-Radierer | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT-Mischung
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| Kit-Komponenten (20 μl Reaktionssystem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direkter RT-Mix | 800 μl |
| RNase-freies ddH2O | 1,7 ml × 2 |
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| Kit-Komponenten (20 μl Reaktionssystem) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direkter qPCR-Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX-Referenzfarbstoff | 40 μl | 200 μl |
| RNase-freies ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Bedienungsanleitung:
