Keine Verstärkungssignale

1. Die Taq-DNA-Polymerase im Kit verliert ihre Aktivität aufgrund unsachgemäßer Lagerung oder Ablauf des Kits.
Empfehlung: Bestätigen Sie die Lagerbedingungen des Kits;Fügen Sie dem PCR-System erneut eine entsprechende Menge Taq-DNA-Polymerase hinzu oder erwerben Sie ein neues Real-Time-PCR-Kit für entsprechende Experimente.

2. Die DNA-Vorlage enthält viele Inhibitoren der Taq-DNA-Polymerase.
Vorschlag: Reinigen Sie die Vorlage erneut oder reduzieren Sie die Menge der verwendeten Vorlage.

3. Die Mg2+-Konzentration ist nicht geeignet.
Empfehlung: Die Mg2+-Konzentration des von uns bereitgestellten 2× Real PCR Mix beträgt 3,5 mM.Bei einigen speziellen Primern und Templates kann die Mg2+-Konzentration jedoch höher sein.Daher können Sie MgCl2 direkt hinzufügen, um die Mg2+-Konzentration zu optimieren.Zur Optimierung wird empfohlen, die Mg2+-Konzentration jedes Mal um 0,5 mM zu erhöhen.

4. Die PCR-Amplifikationsbedingungen sind nicht geeignet und die Primersequenz oder -konzentration ist falsch.
Vorschlag: Bestätigen Sie, dass die Primersequenz korrekt ist und dass der Primer nicht abgebaut wurde.Wenn das Amplifikationssignal nicht gut ist, versuchen Sie, die Annealing-Temperatur zu senken und die Primerkonzentration entsprechend anzupassen.

5. Die Menge der Vorlage ist zu gering oder zu hoch.
Empfehlung: Führen Sie eine Template-Linearisierungsgradientenverdünnung durch und wählen Sie die Template-Konzentration mit dem besten PCR-Effekt für das Real-Time-PCR-Experiment.

NTC hat einen zu hohen Fluoreszenzwert

1. Reagenzkontamination während des Betriebs.
Empfehlung: Für Real-Time-PCR-Experimente die Reagenzien durch neue ersetzen.

2. Während der Vorbereitung des PCR-Reaktionssystems ist eine Kontamination aufgetreten.
Empfehlung: Treffen Sie während des Betriebs die erforderlichen Schutzmaßnahmen, wie z. B. das Tragen von Latexhandschuhen, die Verwendung einer Pipettenspitze mit Filter usw.

3. Die Primer werden abgebaut und der Abbau der Primer führt zu einer unspezifischen Amplifikation.
Vorschlag: Verwenden Sie die SDS-PAGE-Elektrophorese, um festzustellen, ob die Primer abgebaut sind, und ersetzen Sie sie für Echtzeit-PCR-Experimente durch neue Primer.

Primerdimer oder unspezifische Amplifikation

1. Die Mg2+-Konzentration ist nicht geeignet.
Empfehlung: Die Mg2+-Konzentration des von uns bereitgestellten 2× Real PCR EasyTM Mix beträgt 3,5 mM.Bei einigen speziellen Primern und Templates kann die Mg2+-Konzentration jedoch höher sein.Daher können Sie MgCl2 direkt hinzufügen, um die Mg2+-Konzentration zu optimieren.Zur Optimierung wird empfohlen, die Mg2+-Konzentration jedes Mal um 0,5 mM zu erhöhen.

2. Die PCR-Annealing-Temperatur ist zu niedrig.
Vorschlag: Erhöhen Sie die PCR-Annealing-Temperatur jedes Mal um 1℃ oder 2℃.

3. Das PCR-Produkt ist zu lang.
Empfehlung: Die Länge des Real Time PCR-Produkts sollte zwischen 100 und 150 bp liegen, nicht mehr als 500 bp.

4. Die Primer werden abgebaut, und der Abbau der Primer führt zum Auftreten einer spezifischen Amplifikation.
Vorschlag: Verwenden Sie die SDS-PAGE-Elektrophorese, um festzustellen, ob die Primer abgebaut sind, und ersetzen Sie sie für Echtzeit-PCR-Experimente durch neue Primer.

5. Das PCR-System ist fehlerhaft oder zu klein.
Vorschlag: Wenn das PCR-Reaktionssystem zu klein ist, verringert sich die Nachweisgenauigkeit.Am besten verwenden Sie das vom quantitativen PCR-Gerät empfohlene Reaktionssystem, um das Real-Time-PCR-Experiment erneut durchzuführen.

Schlechte Wiederholbarkeit quantitativer Werte

1. Das Gerät weist eine Fehlfunktion auf.
Vorschlag: Zwischen den einzelnen PCR-Löchern des Geräts können Fehler auftreten, die zu einer schlechten Reproduzierbarkeit bei der Temperaturverwaltung oder -detektion führen.Bitte prüfen Sie anhand der Anleitung des entsprechenden Gerätes.

2. Die Reinheit der Probe ist nicht gut.
Empfehlung: Unreine Proben führen zu einer schlechten Reproduzierbarkeit des Experiments, einschließlich der Reinheit des Templates und der Primer.Es ist am besten, das Template erneut zu reinigen, und die Primer werden am besten durch SDS-PAGE gereinigt.

3. Die Vorbereitungs- und Lagerzeit des PCR-Systems ist zu lang.
Empfehlung: Nutzen Sie das Real-Time-PCR-System für PCR-Experimente unmittelbar nach der Vorbereitung und lassen Sie es nicht zu lange stehen.

4. Die PCR-Amplifikationsbedingungen sind nicht geeignet und die Primersequenz oder -konzentration ist falsch.
Vorschlag: Bestätigen Sie, dass die Primersequenz korrekt ist und dass der Primer nicht abgebaut wurde.Wenn das Amplifikationssignal nicht gut ist, versuchen Sie, die Annealing-Temperatur zu senken und die Primerkonzentration entsprechend anzupassen.

5. Das PCR-System ist fehlerhaft oder zu klein.
Vorschlag: Wenn das PCR-Reaktionssystem zu klein ist, verringert sich die Nachweisgenauigkeit.Am besten verwenden Sie das vom quantitativen PCR-Gerät empfohlene Reaktionssystem, um das Real-Time-PCR-Experiment erneut durchzuführen.