(96-Well) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR-Kit – SYBR Green I
Beschreibungen
Der(96-Well) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR-Kit–SYBR Grün Ibietetein einzigartiges Lysepuffersystemto setzen schnell RNA freiaus kultivierter ZelleProben für RT-qPCR-Reaktionen, wodurch zeitaufwendige und arbeitsintensive Verfahren entfallenDer RNA-Reinigungsprozess dauert nur 7 Minuten, um die erforderliche RNA-Vorlage zu erhalten.Der5× Direkter RT-MixUnd2× Direkter qPCR-Mix-SYBRin der Box bereitgestellt kann schnell undErhalten Sie effektiv quantitative EchtzeitdatenPCR-Ergebnisse.
5× Direct RT Mix und 2× Direct qPCR Mix-SYBR weisen eine starke Inhibitortoleranz auf und können das Lysat der zu testenden Probe als Vorlage für eine effiziente reverse Transkription und spezifische Amplifikation verwenden.Das Reagenz enthält die einzigartige Reverse Transkriptase von Foregene mit hoher Affinität für RNA sowie Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs und MgCl2 , Reaktionspuffer, PCR-Optimierer und Stabilisator und kann in Verbindung mit dem Lysepuffer zum schnellen, einfachen und genauen Nachweis der Probe verwendet werden und zeichnet sich durch hohe Empfindlichkeit, starke Spezifität und gute Stabilität aus.
Das Kit ist auf die Mikrosystem-Lyse von kultivierten Zellen mit 96 Vertiefungen ausgerichtet und weist eine gute Gleichmäßigkeit und Konsistenz auf.Die Kit-Komponenten bieten 96 Lysereaktionen, 96 Reverse-Transkriptionsreaktionen und 96×2 qPCR-Reaktionen, die für den einmaligen Gebrauch auf der 96-Well-Zellenplatte Platz finden, wodurch die Verschmutzung durch wiederholtes Öffnen, Einfrieren und Auftauen von Reagenzien und die Verschlechterung der Reagenzienleistung vermieden wird.
Kit-Komponenten
| Zusammensetzung des Kits ( 50 μL-Lysesystem/20 μLRT Reaktionssystem /20μL qPCR-Reaktionssystem) | DRT-03011 | Anmerkung | |
| 96T | |||
| TeilI | PufferCL | 5 ml | ZelleLyse |
| VorgeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| PufferST | 500 μL | ||
| Teil II | DNARadiergummi | 100 μL | |
| 5× Direkter RT-Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Direkter qPCR-Mix-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX-Referenzfarbstoff | 400µL | ||
| RNase- FreiddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mjährlich | 1 Stück | 1 Portion | |
*: Das Lysereagenz DNA Eraser ist in Teil II des Kits enthalten;Zelllyse-, RT- und qPCR-Komponenten können separat erworben werden.
Merkmale und Vorteile
■Einfach und effektiv: Mit der Cell Direct RT-Technologie können RNA-Proben in nur 7 Minuten gewonnen werden.
■ Der Probenbedarf ist gering, es können nur 10 Zellen getestet werden.
■ Hoher Durchsatz: Es kann RNA in Zellen, die in 384-, 96-, 24-, 12- und 6-Well-Platten kultiviert wurden, schnell nachweisen.
■ DNA Eraser kann freigesetzte Genome schnell entfernen und die Auswirkungen auf nachfolgende experimentelle Ergebnisse erheblich reduzieren.
■ Das optimierte RT- und qPCR-System macht die zweistufige RT-PCR-Reverse-Transkription effizienter, die PCR spezifischer und resistenter gegen RT-qPCR-Reaktionsinhibitoren.
Kit-Anwendung
Anwendungsbereich: kultivierte Zellen.
- Durch Probenlyse freigesetzte RNA: Gilt nur für die RT-qPCR-Vorlage dieses Kits.
- Das Kit kann für folgende Zwecke verwendet werden: Genexpressionsanalyse, Überprüfung des siRNA-vermittelten Gen-Silencing-Effekts, Arzneimittelscreening usw.
Lagerung und Haltbarkeit
Teil I dieses Kits sollte bei 4 °C gelagert werden℃;Teil II sollte bei -20℃ gelagert werden.
Foregene Protease Plus II sollte bei 4 °C gelagert werden℃, nicht bei -20℃ einfrieren.
Reagenz 2×Direct qPCR Mix-Taqman sollte bei -20 °C gelagert werden℃im Dunkeln;Bei häufigem Gebrauch kann es auch bei 4 gelagert werden℃ für kurzfristige Lagerung (innerhalb von 10 Tagen aufbrauchen).
Prinzipien des Real-Time-PCR-Primer-Designs
Vorwärts-Primer und Rückwärts-Primer
Für die Echtzeit-PCR ist das Primerdesign sehr wichtig.Primer hängen mit der Spezifität und Effizienz der PCR-Amplifikation zusammen und können unter Bezugnahme auf die folgenden Prinzipien entworfen werden:
- Primerlänge: 18–30 bp.
- GC-Gehalt: 40-60 %.
- Tm-Wert: Primer-Design-Software wie Primer 5 kann den Tm-Wert des Primers angeben.Die Tm-Werte der Upstream- und Downstream-Primer sollten möglichst nahe beieinander liegen.Es kann auch die Tm-Berechnungsformel verwendet werden: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Bei der Durchführung einer PCR wird im Allgemeinen eine Temperatur unterhalb des Primer-Tm-Werts von 5 °C als Annealing-Temperatur gewählt (die entsprechende Erhöhung der Annealing-Temperatur kann die Spezifität der PCR-Reaktion erhöhen).
- Primer und PCR-Produkte:
- Die Länge des Design-Primer-PCR-Amplifikationsprodukts beträgt vorzugsweise 100–150 bp.
- Designprimer im sekundären Strukturbereich der Vorlage sollten möglichst vermieden werden.
- Vermeiden Sie die Bildung von zwei oder mehr komplementären Basen zwischen den 3′-Enden der Upstream- und Downstream-Primer.
- Die terminale Basis des Primers 3‘ kann nicht mit 3 weiteren aufeinanderfolgenden G oder C vorhanden sein.
- Die Primer selbst dürfen keine komplementären Strukturen aufweisen, da sonst eine Haarnadelstruktur entsteht, die die PCR-Amplifikation beeinträchtigt.
- ATCG sollte möglichst gleichmäßig in der Primersequenz verteilt sein und die 3′-terminale Base sollte als T vermieden werden.
Anhang1:Cell DirectRT-qPCR Kit-Komponentent Ergänzungspaket
1. Zelllyselösung
| Zelllyselösung | |||
| Kit-Komponenten (24-Well-Lysesystem / Well) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| TeilICH | Puffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Puffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| TeilII | DNA-Radierer | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT-Mix | |
| Kit-Komponenten (20 μl Reaktionssystem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direkter RT-Mix | 800 μl |
| RNase-freies ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR-Mix | ||
| Kit-Komponenten (20 μl Reaktionssystem) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direktes qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX-Referenzfarbstoff | 40 μl | 200 μl |
| RNase-freies ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Bedienungsanleitung:
