Cell Direct RT qPCR Kit – Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready One-Step qRT-PCR Kits Sonde
Beschreibungen
Dieses Produkt verwendet ein einzigartiges Lysepuffersystem, um RNA aus kultivierten Zellproben für RT-qPCR-Reaktionen schnell freizusetzen, wodurch der zeitaufwändige und mühsame RNA-Reinigungsprozess entfällt und die erforderliche RNA-Vorlage in nur 7 Minuten erhalten wird. Mit dem im Kit enthaltenen 5× Direct RT Mix und 2× Direct qPCR Mix-Taqman können Sie schnell und effizient quantitative PCR-Ergebnisse in Echtzeit erhalten.
5× Direct RT Mix und 2× Direct qPCR Mix-Taqman weisen eine starke Inhibitortoleranz auf und können unter Verwendung des Lysats der zu messenden Probe als Vorlage eine effiziente Umkehrung und spezifische Amplifikation durchführen.Das Reagenz enthält Foregene Reverse Transkriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaktionspuffer, PCR-Optimierer und Stabilisator, der mit Lysepuffer zum schnellen und einfachen Nachweis von Proben verwendet werden kann und sich durch hohe Empfindlichkeit, Spezifität und Stabilität auszeichnet.
Spezifikationen
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit-Komponenten
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Kit-Komponenten 20 μl qPCR-Reaktionssystem | DRT-01021 | DRT-01022 | Notiz | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Teil I | Puffer CL | 4 ml | 20 ml | Zelllyse |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Puffer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Teil II | DNA-Radierer | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direktes qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX-Referenzfarbstoff | 40 μl | 200 μl | ||
| RNase-freies ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Bedienungsanleitung | 1 Stück | 1 Stück | ||
*:Zelllyse, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman können separat erworben werden
Merkmale und Vorteile
■Einfach und effektiv: Mit der Cell Direct RT-Technologie können RNA-Proben in nur 7 Minuten gewonnen werden.
■ Der Probenbedarf ist gering, es können nur 10 Zellen getestet werden.
■ Hoher Durchsatz: Es kann RNA in Zellen, die in 384-, 96-, 24-, 12- und 6-Well-Platten kultiviert wurden, schnell nachweisen.
■ DNA Eraser kann freigesetzte Genome schnell entfernen und die Auswirkungen auf nachfolgende experimentelle Ergebnisse erheblich reduzieren.
■ Das optimierte RT- und qPCR-System macht die zweistufige RT-PCR-Reverse-Transkription effizienter, die PCR spezifischer und resistenter gegen RT-qPCR-Reaktionsinhibitoren.
Kit-Anwendung
Anwendungsbereich: kultivierte Zellen.
- Durch Probenlyse freigesetzte RNA: Gilt nur für die RT-qPCR-Vorlage dieses Kits.
- Das Kit kann für folgende Zwecke verwendet werden: Genexpressionsanalyse, Überprüfung des siRNA-vermittelten Gen-Silencing-Effekts, Arzneimittelscreening usw.
Lagerung und Haltbarkeit
Teil I dieses Kits sollte bei 4 °C gelagert werden℃;Teil II sollte bei -20℃ gelagert werden.
Foregene Protease Plus II sollte bei 4 °C gelagert werden℃, nicht bei -20℃ einfrieren.
Reagenz 2×Direct qPCR Mix-Taqman sollte bei -20 °C gelagert werden℃im Dunkeln;Bei häufigem Gebrauch kann es auch bei 4 gelagert werden℃ für kurzfristige Lagerung (innerhalb von 10 Tagen aufbrauchen).
Prinzipien des Real-Time-PCR-Primer-Designs
Vorwärts-Primer und Rückwärts-Primer
Für die Echtzeit-PCR ist das Primerdesign sehr wichtig.Primer hängen mit der Spezifität und Effizienz der PCR-Amplifikation zusammen und können unter Bezugnahme auf die folgenden Prinzipien entworfen werden:
- Primerlänge: 18–30 bp.
- GC-Gehalt: 40-60 %.
- Tm-Wert: Primer-Design-Software wie Primer 5 kann den Tm-Wert des Primers angeben.Die Tm-Werte der Upstream- und Downstream-Primer sollten möglichst nahe beieinander liegen.Es kann auch die Tm-Berechnungsformel verwendet werden: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Bei der Durchführung einer PCR wird im Allgemeinen eine Temperatur unterhalb des Primer-Tm-Werts von 5 °C als Annealing-Temperatur gewählt (die entsprechende Erhöhung der Annealing-Temperatur kann die Spezifität der PCR-Reaktion erhöhen).
- Primer und PCR-Produkte:
- Die Länge des Design-Primer-PCR-Amplifikationsprodukts beträgt vorzugsweise 100–150 bp.
- Designprimer im sekundären Strukturbereich der Vorlage sollten möglichst vermieden werden.
- Vermeiden Sie die Bildung von zwei oder mehr komplementären Basen zwischen den 3′-Enden der Upstream- und Downstream-Primer.
- Die terminale Basis des Primers 3‘ kann nicht mit 3 weiteren aufeinanderfolgenden G oder C vorhanden sein.
- Die Primer selbst dürfen keine komplementären Strukturen aufweisen, da sonst eine Haarnadelstruktur entsteht, die die PCR-Amplifikation beeinträchtigt.
- ATCG sollte möglichst gleichmäßig in der Primersequenz verteilt sein und die 3′-terminale Base sollte als T vermieden werden.
Anhang1:Cell DirectRT-qPCR Kit-Komponentent Ergänzungspaket
1. Zelllyselösung
| Zelllyselösung | |||
| Kit-Komponenten (24-Well-Lysesystem / Well) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| TeilICH | Puffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Puffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| TeilII | DNA-Radierer | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT-Mix | |
| Kit-Komponenten (20 μl Reaktionssystem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direkter RT-Mix | 800 μl |
| RNase-freies ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR-Mix | ||
| Kit-Komponenten (20 μl Reaktionssystem) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direktes qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX-Referenzfarbstoff | 40 μl | 200 μl |
| RNase-freies ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Bedienungsanleitung:
