Das niedrige Verhältnis von A260/A230 wird normalerweise durch Verunreinigungen mit der maximalen Absorptionswellenlänge bei 230 nm verursacht.Mal sehen, was diese Verunreinigungen beinhalten:

• Häufige Schadstoffe	Absorptionswellenlänge	Verhältniseffekt
  Eiweiß	~230 nm und 280 nm	Gleichzeitige Reduktion von A260/A 280und ein260/A 280Verhältnisse
  Guanidinsalz	220-240 nm	Reduzieren Sie das A260/A 280Verhältnis
  Phenol	~270nm	-
  Trizol	~230 nm und 270 nm	Reduzieren Sie das A260/A 280Verhältnis
  EDTA	~230nm	Reduzieren Sie das A260/A 280Verhältnis
  Ethanol	230-240 nm	Reduzieren Sie das A260/A 280Verhältnis

 
 
 
Absorptionswellenlänge und Kontrastwert häufiger Schadstoffe

PRotein-Kontamination
Die Proteinverschmutzung kann als die häufigste Verschmutzung im Nukleinsäureextraktionsprozess angesehen werden.Protein existiert zwischen der oberen und der unteren wässrigen PhaseorganischPhase.Durch die Verschmutzung verringert sich gleichzeitig das Verhältnis von A260/A280 und A260/A230, und das Verhältnis von A260/A230 wird sich deutlicher ändern als das Verhältnis von A260/A280.
Während der anschließendenReverse Transkriptionor qPCR-Reaktionen, Proteinrückstände können die Enzymfunktion hemmen oder beeinträchtigen.Der beste Weg, eine Proteinkontamination zu vermeiden, besteht darin, beim Absaugen des Überstands den Grundsatz „Lieber weniger als mehr, mehrmals eine kleine Menge“ zu beachten.

2. Guanidiniumverschmutzung
Hydrochlorid (GuHCl) und Guanidinthiocyanat (GTC) haben die Wirkung, Proteine ​​zu denaturieren, wodurch Zellmembranen während des Nukleinsäureextraktionsprozesses schnell zerstört werden können, was zu Proteindenaturierung und -ausfällung führt.Die Absorptionswellenlänge von GuHCl und GTC liegt zwischen 220 und 240 nm und dieRestliches Guanidiniumsalz verringert das Verhältnis von A260/A230.Obwohl das restliche Guanidiniumsalz das Verhältnis verringert,Die Auswirkungen auf nachgelagerte Experimente sind eigentlich vernachlässigbar.

3. Trizol-Kontamination
Der Hauptbestandteil von Trizol ist Phenol.Die Hauptfunktion von Phenol besteht darin, Zellen zu lysieren und Proteine ​​und Nukleinsäuresubstanzen in Zellen freizusetzen.Obwohl Phenol Proteine ​​wirksam denaturieren kann, kann es die RNase-Aktivität nicht vollständig hemmen.Daher werden TRIzol 8-Hydroxychinolin, Guanidinisothiocyanat, β-Mercaptoethanol usw. zugesetzt, um endogene und exogene RNase zu hemmen.
Bei der Extraktion zellulärer RNA kann Trizol die Zellen schnell lysieren und die aus den Zellen freigesetzte Nuklease hemmen, und das restliche Trizol wird das Verhältnis von A260/A230 deutlich reduzieren.
Verarbeitungsmethode: Beim Zentrifugieren ist zu beachten, dass das Phenol in Trizol unter der Bedingung von 4° und Raumtemperatur leicht in der Wasserphase löslich ist.

4. Ethanolrückstände
Im letzten Prozess wird Ethanol verwendet, um die DNA auszufällen und gleichzeitig Salzionen aufzulösen, die möglicherweise an die DNA gebunden sind.Die Absorptionswellenlänge ist am höchstenAbsorptionsspitze vonEthanol liegt ebenfalls bei 230-240 nm, waswird auch das Verhältnis von A260/A230 reduzieren.
Die Methode zur Vermeidung von Ethanolrückständen kann während der letzten Elution zweimal wiederholt werden, wobei das Einblasen erfolgtAbzugshaubeLassen Sie es zwei Minuten lang laufen, damit das Ethanol vollständig verdunsten kann, bevor Sie Puffer zur Elution hinzufügen.
Es sollte jedoch bekannt sein, dass das Verhältnis nur ein Bewertungsindex für die RNA-Qualität ist.Wenn die oben genannten Vorgänge streng reguliert sind, wird die Abweichung zwischen dem Verhältnis und dem Standardbereich keinen großen Einfluss auf nachgelagerte Experimente haben.
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