Direktes RT-qPCR-Kit II
Kit-Beschreibung:
◮Das direkte RT-qPCR-Kit, das von Foregene entwickelte Foreasy Reverse Transkriptase und Foreasy HS Taq DNA-Polymerase mit einzigartigem Reaktionspuffer verwendet, verleiht diesem Kit eine hohe Beständigkeit und Kompatibilität und kann die Reaktion direkt testen, indem das Foregene-Lysesystem als Vorlage verwendet wird.Dieses Kit kann für die Entwicklung eines Nukleinsäure-Nachweiskits für COVID-19 und anderer Nukleinsäure-Nachweiskits für pathogene Bakterien verwendet werden.
Beschreibung
Das Direct RT-qPCR-Kit bietet separat verpackten RT-qPCR-Puffer und hocheffiziente Foreasy HS Taq DNA-Polymeraseund Foreasy Reverse Transkriptase(MMLV),Dies erleichtert die Erstellung von Back-End-Kits und Systemanpassungen im Rahmen einer einfachen Überprüfung.
Das direkte RT-qPCR-Kit, das von Foregene entwickelte Foreasy Reverse Transkriptase und Foreasy HS Taq DNA-Polymerase mit einzigartigem Reaktionspuffer verwendet, verleiht diesem Kit eine hohe Beständigkeit und Kompatibilität und kann die Reaktion direkt testen, indem das Foregene-Lysesystem als Vorlage verwendet wird.Dieses Kit kann für die Entwicklung eines Nukleinsäure-Nachweiskits für COVID-19 und anderer Nukleinsäure-Nachweiskits für pathogene Bakterien verwendet werden.
Dieses Kit kann direkt und schnell als Bestandteil des IVD-Produkts verwendet werden.Es bedarf lediglich einer einfachen Überprüfung, ohne dass eine erneute Entwicklung erforderlich ist.
Spezifikationen
500T, 50.000T
Kit-Komponenten
| Inhalt des Kits (20 μL Reaktionssystem) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Foreasy Rverse Transkriptase (200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq DNA-Polymerase (5 U/μL) | 100 μL×1 | 1 ml×10 |
| 2× Direkte RT-qPCRPuffer | 1 ml ×5 | 500 ml ×1 |
| Anweisung | 1 | 1 |
Bedienschritte
A: Vorlage und Reagenz vorbereiten
1. Bereiten Sie die vorbereitete RNA-Vorlage vor (es wird empfohlen, das Kit der Foregene Total RNA Isolation Kit-Serie zu verwenden, um die RNA-Vorlage zu extrahieren und zu reinigen) oder ein Proben-Cracking-Produkt (es wird empfohlen, das Foregene Lysis-System zu verwenden), spezifische Primer (10 μM) und andere relevante Verbrauchsmaterialien sowie ein Instrument vor.
2. Geben Sie den 2× direkten RT-qPCR-Puffer, RNase-freies ddH2O und 20× ROX-Referenzfarbstoff (falls erforderlich) in die Box mit Eis, sodass diese auf natürliche Weise schmelzen, und mischen Sie vorsichtig.
B: Vorbereitung des RT-qPCR-Systems
Besorgen Sie sich das halbe Volumen des Reaktionspuffers des Reaktionssystems (wenn das Volumen des Systems beispielsweise 20 μL beträgt, sind 10 μL 2× Direct RT-qPCR-Puffer erforderlich).). Fürentsprechende Menge Enzym, das schlagen wir vorM-MLV: 10–30 U/20 μL Reaktionssystem,TaqDNA-Polymerase::1–2 U/20 μL ReaktionssystemDas ist unser Vorschlag, Sie sollten ihn testen und anpassen), fügen Sie RNA-Template, spezifische Primer und Sonden hinzu und fügen Sie RNase-Free ddH hinzu2O bis 20 μL.Die spezifische Vorbereitung des RT-qPCR-Reaktionssystems kann der folgenden Tabelle 1 entnommen werden.
Tabelle 1: Vorbereitung des RT-qPCR-Systems
| Komponente | Volumen | Endgültige Konzentration |
| 2× Direkter RT-qPCR-Puffer | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transkriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA-Polymerase | 1-2 U | |
| Vorwärtsprimer (10 μM) | 0,8 μL | 50–900 nm |
| Reverse Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50–900 nm |
| Sonde (4 μM) | 1 μL | 200 nm |
| Vorlage (RNA oder Lysat) | X μL | |
| 20× ROX-Referenzfarbstoff | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Volle Lautstärke | 20 μL |
Hinweis: Forward Primer und Reverse Primer sind spezifische Primer des Zielgens.Das System der qPCR konnte entsprechend praktischer experimenteller und PCR-Modelle angepasst werden.Für die Endkonzentration der meisten Primer empfehlen wir 400 nM.Bitte passen Sie das Volumen der spezifischen Primer und Sonden entsprechend der vorbereiteten Konzentration und der empfohlenen Endkonzentration an.
1*: Wählen Sie eine geeignete Endkonzentration des ROX-Referenzfarbstoffs gemäß verschiedenen quantitativen PCR-Instrumenten.Die optimale ROX-Referenzfarbstoffkonzentration gängiger quantitativer PCR-Geräte ist in der folgenden Tabelle aufgeführt:
| Quantitative PCR-Instrumente | Endkonzentration des ROX-Referenzfarbstoffs |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Schritt Eins,usw. | 1× (z. B. 1 μl 20×ROX-Referenzfarbstoff in 20 μL-Reaktionssystem hinzufügen) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P und Mx4000 usw. | 0,5× (z. B. 0,5 μl 20×ROX-Referenzfarbstoff in 20 μL-Reaktionssystem hinzufügen) |
| PCR-Gerät von Roche, PCR-Gerät von Bio-Rad, quantitatives PCR-Gerät von Eppendorf usw. | Ohne ROX-Referenzfarbstoff |
Lagerung und Haltbarkeit
Das Kit sollte bei -20 ± 5℃ gelagert werden.Es sollte sofort in einem thermostatischen Kühlschrank mit -20 °C gelagert werden.Bei ordnungsgemäßer Lagerung beträgt die Gültigkeitsdauer 2 Jahre.
